| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-25页 |
| 1.1 抗苗勒管激素的研究进展 | 第11-16页 |
| 1.1.1 抗苗勒管激素的基本结构 | 第11页 |
| 1.1.2 抗苗勒管激素在雌性中的表达 | 第11-13页 |
| 1.1.3 抗苗勒管激素在雄性中的表达 | 第13-14页 |
| 1.1.4 抗苗勒管激素的受体 | 第14页 |
| 1.1.5 抗苗勒管激素的表达调控 | 第14-15页 |
| 1.1.6 抗苗勒管激素的生理作用 | 第15-16页 |
| 1.2 抗苗勒管激素与卵泡发育 | 第16-19页 |
| 1.2.1 卵泡发育 | 第16-18页 |
| 1.2.2 颗粒细胞在卵泡发育过程中的作用 | 第18-19页 |
| 1.3 抗苗勒管激素与转化生长因子 β 超家族 | 第19-22页 |
| 1.3.1 AMH与TGF-β 通路细胞周期的机制 | 第21页 |
| 1.3.2 AMH与TGF-β 通路细胞增殖的机制 | 第21-22页 |
| 1.4 抗苗勒管激素研究方法 | 第22-24页 |
| 1.4.1 抗苗勒管激素主要研究方法 | 第22页 |
| 1.4.2 RNA干扰技术研究抗苗勒管激素 | 第22-24页 |
| 1.5 本项目的研究目的和意义 | 第24-25页 |
| 2 材料 | 第25-31页 |
| 2.1 试验动物与细胞 | 第25页 |
| 2.2 干扰载体 | 第25-26页 |
| 2.3 主要试剂及耗材 | 第26-27页 |
| 2.4 主要试剂盒 | 第27页 |
| 2.5 主要抗体 | 第27-28页 |
| 2.6 引物列表 | 第28页 |
| 2.7 主要实验仪器 | 第28-29页 |
| 2.8 试剂配置 | 第29-31页 |
| 3 方法 | 第31-45页 |
| 3.1 小鼠颗粒细胞的获取与培养 | 第31页 |
| 3.2 细胞免疫荧光 | 第31-32页 |
| 3.2.1 制备细胞爬片 | 第31页 |
| 3.2.2 颗粒细胞荧光免疫化学 | 第31-32页 |
| 3.3 AMH基因RNA干扰载体构建 | 第32-36页 |
| 3.3.1 设计与合成shRNA序列 | 第32-33页 |
| 3.3.2 退火 | 第33页 |
| 3.3.3 重组质粒的构建 | 第33页 |
| 3.3.4 热激转化 | 第33-34页 |
| 3.3.5 测序比对 | 第34页 |
| 3.3.6 AMH干扰质粒大量提取 | 第34-35页 |
| 3.3.7 酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 3.4 干扰质粒转染小鼠颗粒细胞 | 第36页 |
| 3.5 颗粒细胞荧光定量PCR检测 | 第36-39页 |
| 3.5.1 颗粒细胞总RNA的提取 | 第36-37页 |
| 3.5.2 RNA浓度测定 | 第37页 |
| 3.5.3 RNA完整性及质量 | 第37页 |
| 3.5.4 反转录RNA | 第37-38页 |
| 3.5.5 实时定量聚合酶链式反应(Realtime PCR) | 第38-39页 |
| 3.6 颗粒细胞AMH蛋白检测 | 第39-41页 |
| 3.6.1 颗粒细胞总蛋白的提取 | 第39页 |
| 3.6.2 颗粒细胞总蛋白含量的测定 | 第39-40页 |
| 3.6.3 Western blot检测颗粒细胞AMH以及凋亡周期蛋白 | 第40-41页 |
| 3.7 流式检测转染后细胞周期 | 第41-42页 |
| 3.8 流式检测转染后细胞凋亡 | 第42-43页 |
| 3.9 CCK8 法检测细胞增殖 | 第43页 |
| 3.10 ELISA检测雌激素、抑制素B浓度 | 第43-44页 |
| 3.11 统计分析 | 第44-45页 |
| 4 结果与分析 | 第45-59页 |
| 4.1 颗粒细胞AMH定位 | 第45页 |
| 4.2 AMH干扰质粒的构建及鉴定 | 第45-48页 |
| 4.2.1 AMH干扰质粒的构建 | 第45-46页 |
| 4.2.2 AMH干扰质粒的酶切鉴定 | 第46-47页 |
| 4.2.3 AMH干扰质粒测序结果 | 第47-48页 |
| 4.3 AMH对颗粒细胞的干扰效率 | 第48-52页 |
| 4.3.1 AMH干扰质粒转染效率 | 第48-49页 |
| 4.3.2 细胞mRNA水平AMH的干扰效果 | 第49-50页 |
| 4.3.3 细胞蛋白水平AMH的干扰效果 | 第50-52页 |
| 4.4 转染AMH干扰质粒对细胞周期的影响 | 第52-54页 |
| 4.5 转染AMH干扰质粒对细胞凋亡的影响 | 第54-56页 |
| 4.6 转染AMH干扰质粒对细胞增殖的影响 | 第56页 |
| 4.7 转染AMH干扰质粒对颗粒细胞激素分泌的影响 | 第56-57页 |
| 4.8 干扰AMH对颗粒细胞中TGF-β 家族的影响 | 第57-59页 |
| 5 讨论 | 第59-64页 |
| 5.1 AMH蛋白的表达与分布 | 第60页 |
| 5.2 转染AMH干扰质粒对颗粒细胞周期和凋亡的影响 | 第60-61页 |
| 5.3 干扰质粒转染后对颗粒细胞激素分泌的影响 | 第61-62页 |
| 5.4 干扰AMH后其受体和TGF-β 家族成员的表达 | 第62-63页 |
| 5.5 外源激素对于AMH的调节 | 第63-64页 |
| 6 小结 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
