| 中文摘要 | 第14-20页 |
| ABSTRACT | 第20-26页 |
| 符号说明 | 第27-30页 |
| 前言 | 第30-47页 |
| 1 结肠癌综述 | 第31-38页 |
| 1.1 结肠癌的发病机制 | 第31-33页 |
| 1.2 调控结肠癌发生和发展的基因 | 第33-36页 |
| 1.3 APC基因与结肠癌 | 第36-38页 |
| 2 Apc~(Min/+)小鼠模型 | 第38-41页 |
| 2.1 Apc~(Min/+)小鼠模型介绍 | 第38-39页 |
| 2.2 Apc~(Min/+)小鼠模型的应用 | 第39-40页 |
| 2.3 双基因突变小鼠模型介绍 | 第40-41页 |
| 2.4 双基因突变小鼠模型的建立和应用 | 第41页 |
| 3 干扰素-γ基因缺陷与肠道肿瘤 | 第41-43页 |
| 3.1 IFN-γ及其受体基因概述 | 第41-42页 |
| 3.2 IFN-γ及其受体基因缺陷在肠道肿瘤研究中的意义 | 第42-43页 |
| 4 自噬相关基因ATG5缺陷与肠道肿瘤 | 第43-47页 |
| 4.1 自噬相关基因ATG5概述 | 第43-44页 |
| 4.2 ATG5基因缺陷在肠道肿瘤研究中的意义 | 第44-45页 |
| 4.3 ATG5基因缺陷在肠道肿瘤治疗中的意义 | 第45-47页 |
| 第一部分 干扰素-γ基因缺陷对APC突变所致肠道肿瘤的影响 | 第47-81页 |
| 第一节 内源性干扰素-γ基因缺陷对Apc~(Min/+)小鼠肠道肿瘤的影响 | 第47-70页 |
| 1 实验材料 | 第47-54页 |
| 1.1 动物 | 第47页 |
| 1.2 试剂 | 第47-49页 |
| 1.3 试剂配制 | 第49-53页 |
| 1.4 仪器设备 | 第53-54页 |
| 2 实验方法 | 第54-60页 |
| 2.1 双基因缺陷小鼠模型的建立 | 第54页 |
| 2.2 双基因缺陷小鼠基因型鉴定 | 第54-56页 |
| 2.3 小鼠肠道肿瘤大小与数目统计 | 第56页 |
| 2.4 小鼠肠道肿瘤组织病理学研究 | 第56页 |
| 2.5 使用ELISA法检测小鼠血清IFN-γ水平 | 第56页 |
| 2.6 免疫组化方法检测小鼠肠道肿瘤组织中免疫分子的表达 | 第56-58页 |
| 2.7 使用Western-blotting法检测肠道肿瘤组织中相关蛋白的表达 | 第58-60页 |
| 2.8 数据处理 | 第60页 |
| 3 实验结果 | 第60-67页 |
| 3.1 杂合性IFN-γ缺失促进Apc~(Min/+)小鼠肠道肿瘤的生长 | 第60-62页 |
| 3.2 杂合性IFN-γ缺失可以引起Apc~(Min/+)小鼠肠道肿瘤发生癌变 | 第62-63页 |
| 3.3 杂合性IFN-γ缺失降低了血清干扰素-γ水平 | 第63-64页 |
| 3.4 杂合性IFN-γ缺失调节肿瘤微环境中免疫因子的数目和分布 | 第64-65页 |
| 3.5 杂合性IFN-γ缺失促进Wnt/β-catenin及EGFR/ERK1/2信号通路的活化 | 第65-67页 |
| 3.6 杂合性IFN-γ缺失抑制β-catenin的降解 | 第67页 |
| 4 讨论与结论 | 第67-70页 |
| 第二节 干扰素-γ受体基因缺失对APC突变背景的结肠癌细胞生长的影响 | 第70-81页 |
| 1 实验材料 | 第70-73页 |
| 1.1 细胞株 | 第70页 |
| 1.2 试剂 | 第70-71页 |
| 1.3 试剂配制 | 第71-72页 |
| 1.4 仪器设备 | 第72-73页 |
| 2 实验方法 | 第73-75页 |
| 2.1 细胞转染试验 | 第73页 |
| 2.2 MTT法检测细胞增殖试验 | 第73-74页 |
| 2.3 细胞克隆形成试验 | 第74页 |
| 2.4 Western-blotting法检测细胞中相关蛋白的表达 | 第74页 |
| 2.5 数据处理 | 第74-75页 |
| 3 实验结果 | 第75-79页 |
| 3.1 小干扰RNA有效抑制IFN_γR1蛋白的表达 | 第75页 |
| 3.2 HT-29细胞沉默IFN_γR1后对IFN-γ的抑制作用不敏感 | 第75-76页 |
| 3.3 MTT法未检测到IFN_γR1缺陷对人结肠癌细胞HT-29增殖的影响 | 第76页 |
| 3.4 IFN_γR1基因缺陷促进HT-29人结肠癌细胞的克隆形成 | 第76-77页 |
| 3.5 IFN_γR1基因缺陷促进Wnt/β-catenin和EGFR/ERK1/2信号通路的活化 | 第77-78页 |
| 3.6 IFN-γ对HT-29细胞(突变型APC基因)增殖具有显著抑制作用,而对HCT-116细胞(野生型APC基因)的增殖无明显抑制作用 | 第78-79页 |
| 3.7 IFN-γ抑制HT-29细胞增殖的机制 | 第79页 |
| 4 讨论与结论 | 第79-81页 |
| 第二部分 自噬相关基因ATG5缺陷对APC突变所致肠道肿瘤的影响 | 第81-106页 |
| 第一节 内源性的ATG5基因缺陷对Apc~(Min/+)小鼠肠道肿瘤的影响 | 第81-90页 |
| 1 实验材料 | 第81-82页 |
| 1.1 动物 | 第81-82页 |
| 1.2 试剂 | 第82页 |
| 1.3 试剂配制 | 第82页 |
| 1.4 仪器设备 | 第82页 |
| 2 实验方法 | 第82-84页 |
| 2.1 双基因缺陷小鼠模型的建立 | 第82-83页 |
| 2.2 双基因缺陷小鼠基因型鉴定 | 第83页 |
| 2.3 小鼠肠道肿瘤大小与数目统计 | 第83页 |
| 2.4 小鼠肠道肿瘤组织病理学研究 | 第83页 |
| 2.5 Western-blotting法检测小鼠肠道肿瘤组织中相关蛋白的表达 | 第83页 |
| 2.6 数据处理 | 第83-84页 |
| 3 实验结果 | 第84-88页 |
| 3.1 ATG5基因缺陷可以在一定程度上促进Apc~(Min/+)小鼠肠道肿瘤的生长 | 第84-85页 |
| 3.2 ATG5基因缺陷对Apc~(Min/+)小鼠肠道肿瘤的进展无显著影响 | 第85-86页 |
| 3.3 ATG5基因缺陷对细胞自噬水平无显著影响 | 第86页 |
| 3.4 ATG5基因缺陷对细胞凋亡水平无显著影响 | 第86-87页 |
| 3.5 ATG5基因缺陷促进Wnt/β-catenin信号通路的活化 | 第87-88页 |
| 3.6 ATG5基因缺陷促进EGFR/Erk1/2信号通路的活化 | 第88页 |
| 4 讨论与结论 | 第88-90页 |
| 第二节 ATG5基因敲除对APC突变背景的结肠癌细胞生长的影响 | 第90-95页 |
| 1 实验材料 | 第90-91页 |
| 1.1 细胞株 | 第90页 |
| 1.2 试剂 | 第90页 |
| 1.3 试剂配制 | 第90页 |
| 1.4 仪器设备 | 第90-91页 |
| 2 实验方法 | 第91页 |
| 2.1 细胞转染试验 | 第91页 |
| 2.2 细胞增殖试验 | 第91页 |
| 2.3 细胞克隆形成试验 | 第91页 |
| 2.4 数据处理 | 第91页 |
| 3 实验结果 | 第91-93页 |
| 3.1 ATG5基因缺陷可以显著抑制人结肠癌细胞HT-29的增殖 | 第91-92页 |
| 3.2 ATG5基因缺陷抑制人结肠癌细胞HT-29的克隆形成 | 第92-93页 |
| 4 讨论与结论 | 第93-95页 |
| 第三节 ATG5基因缺陷显著提高了干扰素-γ对Apc~(Min/+)小鼠肠道肿瘤的抑制作用 | 第95-106页 |
| 1 实验材料 | 第95-96页 |
| 1.1 动物 | 第95页 |
| 1.2 试剂 | 第95-96页 |
| 1.3 试剂配制 | 第96页 |
| 1.4 仪器设备 | 第96页 |
| 2 实验方法 | 第96-97页 |
| 2.1 小鼠肠道肿瘤大小与数目统计 | 第96页 |
| 2.2 小鼠肠道肿瘤组织病理学研究 | 第96-97页 |
| 2.3 小鼠体重和摄食量测定 | 第97页 |
| 2.4 小鼠血常规测定 | 第97页 |
| 2.5 Western-blotting法检测肠道肿瘤组织中相关蛋白的表达 | 第97页 |
| 2.6 数据处理 | 第97页 |
| 3 实验结果 | 第97-104页 |
| 3.1 ATG5基因缺陷提高了IFN-γ对Apc~(Min/+)小鼠肠道肿瘤的抑制作用 | 第97-100页 |
| 3.2 IFN-γ给药对小鼠体重无显著影响 | 第100-101页 |
| 3.3 IFN-γ给药对小鼠摄食量无显著影响 | 第101页 |
| 3.4 IFN-γ给药不会降低小鼠外周血中白细胞及血小板的数量 | 第101-102页 |
| 3.5 ATG5基因缺陷提高了IFN-γ对Wnt/β-catenin和EGFR/ERK1/2信号的抑制作用 | 第102-103页 |
| 3.6 ATG5基因缺陷提高了IFN-γ对β-catenin核转移的抑制作用 | 第103-104页 |
| 4 讨论与结论 | 第104-106页 |
| 全文总结 | 第106-107页 |
| 论文的创新性及意义 | 第107页 |
| 论文的不足之处 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第122-123页 |
| 代表性论文全文 | 第123-146页 |
| 论文1 | 第123-131页 |
| 论文2 | 第131-140页 |
| 论文3 | 第140-146页 |
| 附件 | 第146页 |
