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抑癌基因PTEN在不同肿瘤细胞株的表达及其对CIK杀伤肿瘤细胞功能的影响

摘要第6-10页
Abstract第10-14页
前言第15-19页
第一部分 肿瘤细胞系抑癌基因PTEN的突变研究第19-29页
    引言第19页
    1 实验材料第19-20页
        1.1 实验样本第19-20页
        1.2 实验试剂第20页
        1.3 实验仪器第20页
    2 实验方法第20-23页
        2.1 肿瘤细胞复苏、传代培养及收集第20-21页
        2.2 基因组DNA的提取和纯度分析第21页
        2.3 HRM筛选PCR条件优化第21-22页
        2.4 HRM筛选突变分析第22页
        2.5 HRM筛选突变细胞测序验证第22页
        2.6 TA克隆鉴定细胞基因组突变类别第22-23页
    3 结果第23-27页
        3.1 基因组电泳和纯度分析结果第23-24页
        3.2 HRM筛选PCR条件优化结果第24-25页
        3.3 HRM筛选分析曲线第25-26页
        3.4 HRM测序验证结果第26页
        3.5 TA克隆测序鉴定结果第26-27页
    4 讨论第27-28页
    5 小结第28-29页
第二部分 各肿瘤细胞系抑癌基因PTEN的表达量研究第29-36页
    引言第29页
    1 实验材料第29-30页
        1.1 实验样本第29-30页
        1.2 实验试剂第30页
        1.3 实验仪器第30页
    2 实验方法第30-32页
        2.1 肿瘤细胞复苏、传代培养及收集第30页
        2.2 肿瘤细胞总RNA的提取和质量分析第30-31页
        2.3 c DNA第一链的合成第31页
        2.4 PTEN表达荧光PCR定量检测第31-32页
    3 结果第32-34页
        3.1 总RNA琼脂糖电泳和质量分析结果第32页
        3.2 不同肿瘤细胞PTEN相对表达量结果第32-34页
    4 讨论第34页
    5 小结第34-36页
第三部分 PTEN影响肿瘤细胞生理活性及相关免疫分子表达研究第36-48页
    引言第36页
    1 实验材料第36-37页
        1.1 实验样本第36-37页
        1.2 实验试剂第37页
        1.3 实验仪器第37页
    2 实验方法第37-40页
        2.1 pc DNA3.1‐PTEN重组表达体系的构建第37-38页
        2.2 肿瘤细胞转染及鉴定表达第38页
        2.3 PTEN转染前后肿瘤细胞MTT法增殖分析第38页
        2.4 PTEN转染前后肿瘤细胞PI法测定细胞周期变化第38-39页
        2.5 PTEN转染前后肿瘤细胞划痕法测定肿瘤细胞迁移变化第39页
        2.6 RT‐PCR法检测肿瘤细胞相关免疫分子的表达第39-40页
    3 结果第40-46页
        3.1 pc DNA3.1‐PTEN重组表达体系构建结果第40-41页
        3.2 PTEN转染定量结果第41页
        3.3 PTEN转染前后肿瘤细胞活性结果第41-42页
        3.4 PTEN转染前后肿瘤细胞周期变化结果第42-44页
        3.5 PTEN转染影响肿瘤细胞迁移结果第44-45页
        3.6 PTEN表达影响肿瘤细胞免疫相关分子表达结果第45-46页
    4 讨论第46-47页
    5 小结第47-48页
第四部分 健康人CIK细胞对不同肿瘤细胞杀伤及与PTEN表达关系研究第48-57页
    引言第48-49页
    1 实验材料第49-50页
        1.1 实验样本第49页
        1.2 实验试剂第49-50页
        1.3 实验仪器第50页
    2 实验方法第50-52页
        2.1 肿瘤细胞复苏、传代培养第50页
        2.2 健康人CIK细胞的诱导和培养第50-51页
        2.3 CIK诱导前后免疫表型分析第51页
        2.4 CIK细胞对不同肿瘤细胞杀伤及与PTEN相对表达关系分析第51页
        2.5 肿瘤细胞转染前后CIK细胞杀伤变化实验第51-52页
    3 结果第52-55页
        3.1CIK诱导前后CD3CD56比例变化第52页
        3.2 CIK细胞对肿瘤细胞杀伤效率及其与肿瘤靶细胞PTEN相对表达水平关系结果第52-54页
        3.3 CIK细胞对肿瘤细胞转染前后杀伤效率变化结果第54-55页
    4 讨论第55-56页
    5 小结第56-57页
讨论第57-61页
参考文献第61-67页
附录一 英文缩略词表第67-68页
附录二 质粒图谱第68-69页
致谢第69页

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