| 摘要 | 第6-10页 |
| Abstract | 第10-14页 |
| 前言 | 第15-19页 |
| 第一部分 肿瘤细胞系抑癌基因PTEN的突变研究 | 第19-29页 |
| 引言 | 第19页 |
| 1 实验材料 | 第19-20页 |
| 1.1 实验样本 | 第19-20页 |
| 1.2 实验试剂 | 第20页 |
| 1.3 实验仪器 | 第20页 |
| 2 实验方法 | 第20-23页 |
| 2.1 肿瘤细胞复苏、传代培养及收集 | 第20-21页 |
| 2.2 基因组DNA的提取和纯度分析 | 第21页 |
| 2.3 HRM筛选PCR条件优化 | 第21-22页 |
| 2.4 HRM筛选突变分析 | 第22页 |
| 2.5 HRM筛选突变细胞测序验证 | 第22页 |
| 2.6 TA克隆鉴定细胞基因组突变类别 | 第22-23页 |
| 3 结果 | 第23-27页 |
| 3.1 基因组电泳和纯度分析结果 | 第23-24页 |
| 3.2 HRM筛选PCR条件优化结果 | 第24-25页 |
| 3.3 HRM筛选分析曲线 | 第25-26页 |
| 3.4 HRM测序验证结果 | 第26页 |
| 3.5 TA克隆测序鉴定结果 | 第26-27页 |
| 4 讨论 | 第27-28页 |
| 5 小结 | 第28-29页 |
| 第二部分 各肿瘤细胞系抑癌基因PTEN的表达量研究 | 第29-36页 |
| 引言 | 第29页 |
| 1 实验材料 | 第29-30页 |
| 1.1 实验样本 | 第29-30页 |
| 1.2 实验试剂 | 第30页 |
| 1.3 实验仪器 | 第30页 |
| 2 实验方法 | 第30-32页 |
| 2.1 肿瘤细胞复苏、传代培养及收集 | 第30页 |
| 2.2 肿瘤细胞总RNA的提取和质量分析 | 第30-31页 |
| 2.3 c DNA第一链的合成 | 第31页 |
| 2.4 PTEN表达荧光PCR定量检测 | 第31-32页 |
| 3 结果 | 第32-34页 |
| 3.1 总RNA琼脂糖电泳和质量分析结果 | 第32页 |
| 3.2 不同肿瘤细胞PTEN相对表达量结果 | 第32-34页 |
| 4 讨论 | 第34页 |
| 5 小结 | 第34-36页 |
| 第三部分 PTEN影响肿瘤细胞生理活性及相关免疫分子表达研究 | 第36-48页 |
| 引言 | 第36页 |
| 1 实验材料 | 第36-37页 |
| 1.1 实验样本 | 第36-37页 |
| 1.2 实验试剂 | 第37页 |
| 1.3 实验仪器 | 第37页 |
| 2 实验方法 | 第37-40页 |
| 2.1 pc DNA3.1‐PTEN重组表达体系的构建 | 第37-38页 |
| 2.2 肿瘤细胞转染及鉴定表达 | 第38页 |
| 2.3 PTEN转染前后肿瘤细胞MTT法增殖分析 | 第38页 |
| 2.4 PTEN转染前后肿瘤细胞PI法测定细胞周期变化 | 第38-39页 |
| 2.5 PTEN转染前后肿瘤细胞划痕法测定肿瘤细胞迁移变化 | 第39页 |
| 2.6 RT‐PCR法检测肿瘤细胞相关免疫分子的表达 | 第39-40页 |
| 3 结果 | 第40-46页 |
| 3.1 pc DNA3.1‐PTEN重组表达体系构建结果 | 第40-41页 |
| 3.2 PTEN转染定量结果 | 第41页 |
| 3.3 PTEN转染前后肿瘤细胞活性结果 | 第41-42页 |
| 3.4 PTEN转染前后肿瘤细胞周期变化结果 | 第42-44页 |
| 3.5 PTEN转染影响肿瘤细胞迁移结果 | 第44-45页 |
| 3.6 PTEN表达影响肿瘤细胞免疫相关分子表达结果 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-47页 |
| 5 小结 | 第47-48页 |
| 第四部分 健康人CIK细胞对不同肿瘤细胞杀伤及与PTEN表达关系研究 | 第48-57页 |
| 引言 | 第48-49页 |
| 1 实验材料 | 第49-50页 |
| 1.1 实验样本 | 第49页 |
| 1.2 实验试剂 | 第49-50页 |
| 1.3 实验仪器 | 第50页 |
| 2 实验方法 | 第50-52页 |
| 2.1 肿瘤细胞复苏、传代培养 | 第50页 |
| 2.2 健康人CIK细胞的诱导和培养 | 第50-51页 |
| 2.3 CIK诱导前后免疫表型分析 | 第51页 |
| 2.4 CIK细胞对不同肿瘤细胞杀伤及与PTEN相对表达关系分析 | 第51页 |
| 2.5 肿瘤细胞转染前后CIK细胞杀伤变化实验 | 第51-52页 |
| 3 结果 | 第52-55页 |
| 3.1CIK诱导前后CD3CD56比例变化 | 第52页 |
| 3.2 CIK细胞对肿瘤细胞杀伤效率及其与肿瘤靶细胞PTEN相对表达水平关系结果 | 第52-54页 |
| 3.3 CIK细胞对肿瘤细胞转染前后杀伤效率变化结果 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-56页 |
| 5 小结 | 第56-57页 |
| 讨论 | 第57-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 附录一 英文缩略词表 | 第67-68页 |
| 附录二 质粒图谱 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
