| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 主要符号对照表 | 第8-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-27页 |
| 1.1 肌肉生长抑制素 | 第13-16页 |
| 1.1.1 MSTN的研究历史 | 第13-14页 |
| 1.1.2 MSTN结构、分布和特征 | 第14-16页 |
| 1.2 肌肉肌酸激酶 | 第16-19页 |
| 1.2.1 M-CK结构、分布和特征 | 第17-19页 |
| 1.3 生肌调节因子 | 第19-23页 |
| 1.3.1 MyoD基因家族的研究历史 | 第20页 |
| 1.3.2 Myo D基因家族的分子结构 | 第20-21页 |
| 1.3.3 Myo D基因家族的功能特点 | 第21-23页 |
| 1.4 RNA干扰技术 | 第23-24页 |
| 1.4.1 RNA干扰技术的发现 | 第23页 |
| 1.4.2 RNA干扰的机制 | 第23-24页 |
| 1.4.3 RNA干扰技术的应用前景 | 第24页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第24-27页 |
| 第2章 黄河裸裂尻鱼MSTN基因的体外干扰 | 第27-41页 |
| 2.1 材料 | 第27页 |
| 2.1.1 样本采集 | 第27页 |
| 2.2 方法 | 第27-32页 |
| 2.2.1 构建shRNA重组腺病毒载体 | 第27-28页 |
| 2.2.2 FHM细胞培养 | 第28-29页 |
| 2.2.3 胖头鱼肌肉细胞生长曲线的绘制 | 第29页 |
| 2.2.4 细胞的冻存和复苏 | 第29页 |
| 2.2.5 胖头鱼肌肉细胞核观察 | 第29-30页 |
| 2.2.6 腺病毒转染胖头鱼肌肉细胞 | 第30页 |
| 2.2.7 FHM细胞中总RNA的提取和cDNA第一链的合成 | 第30-31页 |
| 2.2.8 Real-time PCR法检测RAN干扰后MSTN基因在FHM细胞中的表达情况 | 第31-32页 |
| 2.2.9 Real-time PCR检测胖头鱼肌肉细胞MSTN基因RNA干扰的相对表达量 | 第32页 |
| 2.3 结果 | 第32-38页 |
| 2.3.1 黄河裸裂尻鱼shRNA重组腺病毒载体的构建 | 第32-35页 |
| 2.3.2 FHM细胞的体外培养和形态观察 | 第35-36页 |
| 2.3.3 FHM细胞生长曲线的绘制 | 第36-37页 |
| 2.3.4 FHM细胞核观察 | 第37页 |
| 2.3.5 腺病毒转染FHM细胞 | 第37-38页 |
| 2.3.6 RNA干扰后FHN细胞中MSTN基因的相对表达量 | 第38页 |
| 2.4 讨论 | 第38-41页 |
| 第3章 黄河裸裂尻鱼MSTN基因体内干扰 | 第41-55页 |
| 3.1 材料 | 第41页 |
| 3.1.1 样本采集 | 第41页 |
| 3.2 方法 | 第41-47页 |
| 3.2.1 黄河裸裂尻鱼MSTN基因多克隆抗体的制备 | 第41-45页 |
| 3.2.2 腺病毒注射方法与分组 | 第45页 |
| 3.2.3 Real-time PCR检测RNA干扰后MSTN基因表达的影响 | 第45-46页 |
| 3.2.4 Western-blotting检测RNA干扰后MSTN基因的表达量 | 第46-47页 |
| 3.2.5 黄河裸裂尻鱼RNA干扰前后体重的变化 | 第47页 |
| 3.3 结果 | 第47-52页 |
| 3.3.1 黄河裸裂尻鱼MSTN多克隆抗体制备 | 第47-50页 |
| 3.3.2 Real-time PCR检测黄河裸裂尻鱼RNA干扰后MSTN的相对表达量 | 第50-51页 |
| 3.3.3 Western-blotting测定RNA干扰对MSTN蛋白相对表达情况 | 第51页 |
| 3.3.4 MSTN基因沉默后黄河裸裂尻鱼体重变化情况 | 第51-52页 |
| 3.4 讨论 | 第52-55页 |
| 第4章 MSTN上下游基因的克隆与分析 | 第55-81页 |
| 4.1 材料 | 第55页 |
| 4.1.1 样本采集 | 第55页 |
| 4.2 方法 | 第55-59页 |
| 4.2.1 黄河裸裂尻鱼各组织总RNA的提取和cDNA第一链的合成 | 第55-56页 |
| 4.2.2 引物的设计与合成 | 第56-57页 |
| 4.2.3 黄河裸裂尻鱼MyoD基因家族和肌肉肌酸激酶核心片段克隆 | 第57页 |
| 4.2.4 Myo D基因家族与M-CK基因核心片段扩增产物与pMD19-T载体的转化连接 | 第57-58页 |
| 4.2.5 M-CK基因cDNA 5'末端和 3'末端的克隆 | 第58页 |
| 4.2.6 RT-PCR法检测M-CK基因在黄河裸裂尻鱼各组织表达特征 | 第58页 |
| 4.2.7 Real-time PCR法检测M-CK基因在黄河裸裂尻鱼各组织表达特征 | 第58-59页 |
| 4.2.8 生物信息学分析 | 第59页 |
| 4.3 结果 | 第59-78页 |
| 4.3.1 M-CK基因和MyoD基因家族序列特征 | 第59-67页 |
| 4.3.2 M-CK基因和MyoD基因家族氨基酸序列同源性分析 | 第67-74页 |
| 4.3.3 系统发育分析 | 第74-77页 |
| 4.3.4 黄河裸裂尻鱼肌酸激酶基因的组织表达特征 | 第77-78页 |
| 4.4 讨论 | 第78-81页 |
| 第5章 MSTN基因RNA干扰后对上下游基因表达调控的影响 | 第81-87页 |
| 5.1 材料 | 第81-82页 |
| 5.1.1 样本采集 | 第81-82页 |
| 5.2 方法 | 第82页 |
| 5.2.1 Real-time PCR检测RNA干扰后上下游基因的相对表达量 | 第82页 |
| 5.3 结果 | 第82-83页 |
| 5.3.1 Real-time PCR检测RNA干扰后上下游基因的相对表达量 | 第82-83页 |
| 5.4 讨论 | 第83-87页 |
| 第6章 结论 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-99页 |
| 致谢 | 第99-101页 |
| 作者简介 | 第101页 |
