| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-40页 |
| 1.1 人巨细胞病毒(HCMV) | 第14-24页 |
| 1.1.1 人巨细胞病毒概述 | 第14-19页 |
| 1.1.2 人巨细胞病毒DNA复制概述 | 第19-21页 |
| 1.1.3 病毒及宿主的相互作用网络图 | 第21-24页 |
| 1.2 人免疫缺陷病毒1型(HIV-1) | 第24-28页 |
| 1.2.1 人免疫缺陷病毒概述 | 第24-26页 |
| 1.2.2 HCMV-HIV共感染 | 第26-28页 |
| 1.3 小泛素样修饰蛋白(SUMO) | 第28-33页 |
| 1.3.1 小泛素样修饰蛋白概述 | 第28-29页 |
| 1.3.2 疱疹病毒与SUMO的关系 | 第29-33页 |
| 1.4 酵母双杂交技术 | 第33-38页 |
| 1.4.1 酵母双杂交技术原理 | 第33-35页 |
| 1.4.2 酵母双杂交技术应用1:寻找相互作用蛋白(文库筛选) | 第35页 |
| 1.4.3 酵母双杂交技术应用2:高通量验证蛋白-蛋白间相互作用(酵母交配) | 第35-36页 |
| 1.4.5 酵母双杂交技术的新发展 | 第36-38页 |
| 1.5 验证蛋白质相互作用的常见方法 | 第38-40页 |
| 1.5.1 Pull-down技术 | 第38页 |
| 1.5.2 激光共聚焦 | 第38页 |
| 1.5.3 免疫共沉淀 | 第38-39页 |
| 1.5.4 其他(生物传感器、非变性胶、质谱等) | 第39-40页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第40-60页 |
| 2.1 通用实验仪器和设备 | 第40页 |
| 2.2 通用实验试剂 | 第40-41页 |
| 2.3 常规分子克隆实验 | 第41-45页 |
| 2.3.1 制备大肠杆菌化学方法感受态细胞 | 第41-42页 |
| 2.3.2 制备大肠杆菌电击转化感受态细胞 | 第42-43页 |
| 2.3.3 碱裂解法小量质粒提取 | 第43-44页 |
| 2.3.4 文库质粒的大规模提取 | 第44-45页 |
| 2.3.5 PCR和限制性酶切 | 第45页 |
| 2.3.6 定点突变PCR | 第45页 |
| 2.4 酵母双杂交涉及的实验 | 第45-51页 |
| 2.4.1 酵母双杂交实验中涉及的试剂信息 | 第45页 |
| 2.4.2 文库滴定和扩增 | 第45-46页 |
| 2.4.3 酵母培养基 | 第46-48页 |
| 2.4.4 制备酵母感受态 | 第48页 |
| 2.4.5 酵母质粒提取 | 第48-49页 |
| 2.4.7 酵母双杂交文库筛选 | 第49-50页 |
| 2.4.8 酵母交配 | 第50-51页 |
| 2.5 细胞学实验 | 第51-54页 |
| 2.5.1 细胞培养基和冻存液 | 第51-52页 |
| 2.5.2 细胞传代培养 | 第52-53页 |
| 2.5.3 磷酸钙转染 | 第53页 |
| 2.5.4 脂质体转染 | 第53-54页 |
| 2.6 蛋白质学实验 | 第54-59页 |
| 2.6.1 原核表达和纯化 | 第54-55页 |
| 2.6.2 PAGE电泳和Western blot | 第55-58页 |
| 2.6.3 His-Pull down | 第58页 |
| 2.6.4 激光共聚焦 | 第58页 |
| 2.6.5 免疫共沉淀 | 第58-59页 |
| 2.7 生物信息学实验 | 第59-60页 |
| 第三章 系统筛选人巨细胞病毒DNA复制蛋白的相互作用细胞蛋白 | 第60-91页 |
| 3.1 概述 | 第60-62页 |
| 3.2 实验过程与结果 | 第62-81页 |
| 3.2.1 酵母双杂交以及哺乳细胞表达质粒的构建 | 第63-64页 |
| 3.2.2 DNA-BD/bait的酵母转化及鉴定 | 第64页 |
| 3.2.3 BD/bait蛋白的自激活实验 | 第64页 |
| 3.2.4 文库的扩增与滴度测定 | 第64页 |
| 3.2.5 文库筛选和阳性克隆的x-gal显色试验 | 第64-65页 |
| 3.2.6 酵母质粒的提取和prey质粒的分离 | 第65-67页 |
| 3.2.7 假阳性克隆的排除(酵母回交实验) | 第67页 |
| 3.2.8 序列分析和整理 | 第67-74页 |
| 3.2.9 免疫共沉淀验证 | 第74-76页 |
| 3.2.10 蛋白质相互作用网络图的拓扑学分析 | 第76页 |
| 3.2.11 siRNA干扰实验(实验路线设计) | 第76-81页 |
| 3.3 分析与讨论 | 第81-89页 |
| 3.4 总结 | 第89-91页 |
| 第四章 系统筛选人巨细胞病毒和人免疫缺陷病毒间蛋白相互作用 | 第91-114页 |
| 4.1 概述 | 第91-94页 |
| 4.2 实验过程与结果 | 第94-110页 |
| 4.2.1 病毒蛋白的构建 | 第94-99页 |
| 4.2.2 酵母交配流程说明 | 第99-101页 |
| 4.2.3 BD-HIV同AD-HCMV的测试 | 第101-102页 |
| 4.2.4 AD-HIV同BD-HCMV的测试 | 第102-108页 |
| 4.2.5 确保实验可靠的新策略 | 第108-109页 |
| 4.2.6 筛选结果和后继实验 | 第109-110页 |
| 4.3 分析与讨论 | 第110-112页 |
| 4.4 总结 | 第112-114页 |
| 第五章 HCMV DNA聚合酶辅助因子ppUL44的sumoylation研究 | 第114-131页 |
| 5.1 概述 | 第114-117页 |
| 5.2 实验过程与结果 | 第117-128页 |
| 5.2.1 质粒的构建 | 第117-119页 |
| 5.2.2 酵母双杂交 | 第119页 |
| 5.2.3 激光共聚焦 | 第119-120页 |
| 5.2.4 His Pull down | 第120-121页 |
| 5.2.5 免疫共沉淀 | 第121-122页 |
| 5.2.6 确定ppUL44同UBC9的结合域 | 第122-123页 |
| 5.2.7 证实ppUL44为sumoylation的底物 | 第123-126页 |
| 5.2.8 证实K410位为sumoylation的主要位点 | 第126-128页 |
| 5.3 分析与讨论 | 第128-129页 |
| 5.4 总结 | 第129-131页 |
| 第六章 综述:人巨细胞病毒的免疫逃逸 | 第131-138页 |
| 参考文献 | 第138-149页 |
| 博士期间已发表和正在撰写的论文 | 第149页 |
