| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-27页 |
| 1.1 阿霉素概述 | 第17页 |
| 1.2 阿霉素的半化学合成 | 第17-18页 |
| 1.3 阿霉素的生物合成 | 第18-20页 |
| 1.3.1 紫红霉酮合成 | 第18-20页 |
| 1.3.2 胸腺嘧啶核苷二磷酸-柔红糖胺合成 | 第20页 |
| 1.3.3 糖基化及修饰 | 第20页 |
| 1.4 可产阿霉素菌株 | 第20页 |
| 1.5 生物法合成阿霉素研究进展 | 第20-21页 |
| 1.5.1 S.peucetius ATCC 27952为宿主 | 第20-21页 |
| 1.5.2 波赛链霉菌为宿主 | 第21页 |
| 1.6 合成生物学 | 第21-22页 |
| 1.7 天然产物的异源表达策略 | 第22-24页 |
| 1.8 克雷伯氏菌 | 第24-25页 |
| 1.9 2,3-丁二醇 | 第25页 |
| 1.10 1,3-丙二醇 | 第25-26页 |
| 1.11 本研究立项意义 | 第26-27页 |
| 第二章 多基因串联共表达载体构建 | 第27-33页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 实验材料 | 第27-28页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第27页 |
| 2.2.2 试剂与仪器 | 第27-28页 |
| 2.2.3 培养基 | 第28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-30页 |
| 2.3.1 大肠杆菌E.coli质粒载体提取 | 第28页 |
| 2.3.2 PCR反应扩增目的基因片段 | 第28-29页 |
| 2.3.3 目的基因的产物回收 | 第29页 |
| 2.3.4 琼脂糖切胶回收 | 第29页 |
| 2.3.5 酶切连接的反应体系 | 第29-30页 |
| 2.3.6 热转化法转化E.coli | 第30页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第30-31页 |
| 2.4.1 多基因串联共表达载体构建 | 第31页 |
| 2.5 本章小结 | 第31-33页 |
| 第三章 阿霉素代谢途径关键酶基因克隆与表达 | 第33-47页 |
| 3.1 引言 | 第33页 |
| 3.2 实验材料 | 第33-34页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第33-34页 |
| 3.2.2 试剂与仪器 | 第34页 |
| 3.2.3 培养基 | 第34页 |
| 3.3 实验方法 | 第34-39页 |
| 3.3.1 DSMZ 41231基因组的提取 | 第34-35页 |
| 3.3.2 大肠杆菌E.coli质粒载体提取 | 第35页 |
| 3.3.3 PCR反应扩增目的基因片段 | 第35-36页 |
| 3.3.4 目的基因的产物回收 | 第36页 |
| 3.3.5 琼脂糖切胶回收 | 第36页 |
| 3.3.6 酶切连接的反应体系 | 第36-37页 |
| 3.3.7 T载体构建 | 第37-38页 |
| 3.3.8 热转化法转化E.coli | 第38页 |
| 3.3.9 重组大肠杆菌的摇瓶培养表达 | 第38-39页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第39-45页 |
| 3.4.1 DSMZ 41231基因组的提取 | 第39-42页 |
| 3.4.2 关键酶基因的表达载体的构建与表达 | 第42-45页 |
| 3.5 本章小结 | 第45-47页 |
| 第四章 克雷伯氏菌的生长特性研究 | 第47-57页 |
| 4.1 引言 | 第47页 |
| 4.2 实验材料 | 第47-48页 |
| 4.2.1 菌株与质粒 | 第47-48页 |
| 4.2.2 试剂与仪器 | 第48页 |
| 4.2.3 培养基 | 第48页 |
| 4.3 实验方法 | 第48-52页 |
| 4.3.1 Klebsiella.AA 405基因组的提取 | 第48-49页 |
| 4.3.2 大肠杆菌E.coli质粒载体提取 | 第49页 |
| 4.3.3 PCR反应扩增目的基因片段 | 第49页 |
| 4.3.4 目的基因的产物回收 | 第49-50页 |
| 4.3.5 琼脂糖切胶回收 | 第50页 |
| 4.3.6 酶切连接的反应体系 | 第50-51页 |
| 4.3.7 热转化法转化E.coli | 第51页 |
| 4.3.8 重组质粒电转化法至Klebsiella.AA 405 | 第51页 |
| 4.3.9 发酵重组Klebsiella.AA 405 | 第51页 |
| 4.3.10 代谢物的测定方法 | 第51-52页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第52-56页 |
| 4.4.1 Klebsiella.AA 405基因组的提取 | 第52-53页 |
| 4.4.2 目的基因的克隆 | 第53-54页 |
| 4.4.3 摇瓶发酵产1,3-PD、2,3-BD的研究 | 第54-56页 |
| 4.5 本章小结 | 第56-57页 |
| 第五章 总结与展望 | 第57-59页 |
| 5.1 总结 | 第57页 |
| 5.2 创新点 | 第57页 |
| 5.3 问题与建议 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 附录1.本研究用到的试剂 | 第65-67页 |
| 附录2 本研究所用到的仪器 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69-71页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第71-73页 |
| 导师和作者简介 | 第73-74页 |
| 附件 | 第74-75页 |
