| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第9-19页 |
| 1.1 橡胶树简介 | 第9页 |
| 1.2 橡胶树炭疽病 | 第9-11页 |
| 1.2.1 炭疽病发生情况 | 第9-10页 |
| 1.2.2 病原学 | 第10页 |
| 1.2.3 生物学特性 | 第10-11页 |
| 1.3 炭疽菌的侵染 | 第11页 |
| 1.4 真菌效应蛋白的研究进展 | 第11-14页 |
| 1.4.1 真菌效应蛋白的定义及特点 | 第11-12页 |
| 1.4.2 真菌效应蛋白的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.5 LysM效应蛋白的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.5.1 LysM型效应蛋白的结构 | 第14页 |
| 1.5.2 LysM效应蛋白的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.6 基因敲除技术的研究进展 | 第16页 |
| 1.7 本研究的目的意义 | 第16-18页 |
| 1.8 本研究的技术路线 | 第18-19页 |
| 2 实验材料 | 第19-22页 |
| 2.1 植物材料和菌株 | 第19页 |
| 2.2 药品和试剂 | 第19-20页 |
| 2.3 实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.4 培养基和试剂配方 | 第21-22页 |
| 3 实验方法 | 第22-29页 |
| 3.1 橡胶树炭疽病菌基因组DNA和总RNA的提取 | 第22-23页 |
| 3.1.1 基因组DNA提取 | 第22页 |
| 3.1.2 橡胶炭疽病菌总RNA提取 | 第22-23页 |
| 3.2 Cg4LsyM基因RT-PCR扩增 | 第23-24页 |
| 3.3 基因序列生物信息学分析 | 第24页 |
| 3.4 Cg4LsyM基因敲除载体的构建 | 第24-26页 |
| 3.4.1 Cg4LsyM基因上下游同源臂片段的获得 | 第24-25页 |
| 3.4.2 pCB1532质粒DNA的线性化及回收 | 第25页 |
| 3.4.3 同源臂上游片段与线性化pCB1532质粒酶连和转化 | 第25页 |
| 3.4.4 同源臂下游片段与线性化pCB1532-A质粒酶连和转化 | 第25-26页 |
| 3.5 pCB1532-ToxA-Cg4LysM-GUS载体的构建 | 第26页 |
| 3.6 敲除载体转化橡胶树炭疽病菌原生质体 | 第26-27页 |
| 3.6.1 橡胶树胶胞炭疽病菌原生质体的制备(何芬,2014) | 第26-27页 |
| 3.6.2 敲除载体转化原生质体(汪倩,2015) | 第27页 |
| 3.7 橡胶胶孢炭疽菌Cg4LsyM敲除转化子的鉴定 | 第27页 |
| 3.8 Cg4LsyM敲除转化子表型的观察 | 第27-28页 |
| 3.8.1 转化子菌落表型的观察和菌落直径的测量 | 第27-28页 |
| 3.8.2 转化子孢子计数和菌丝的观察 | 第28页 |
| 3.8.3 玻璃纸穿透力分析 | 第28页 |
| 3.8.4 转化子碳源利用分析 | 第28页 |
| 3.9 △Cg4LsyM的致病力分析 | 第28-29页 |
| 4 结果与分析 | 第29-39页 |
| 4.1 候选基因Cg4LysM的扩增 | 第29-31页 |
| 4.2 橡胶树胶孢炭疽病菌Cg4LysM基因生物信息学分析 | 第31-33页 |
| 4.3 Cg4LysM基因的敲除载体构建 | 第33-34页 |
| 4.4 △Cg4LysM敲除突变体的获得 | 第34-36页 |
| 4.4.1 抗性转化子的获得 | 第34-35页 |
| 4.4.2 △Cg4LysM敲除突变体的分子鉴定 | 第35-36页 |
| 4.5 △Cg4LysM敲除突变体菌株的表型观察 | 第36-38页 |
| 4.5.1 Cg4LysM基因对菌丝生长的影响 | 第36页 |
| 4.5.2 Cg4LysM基因对胶孢炭疽病菌产胞的影响 | 第36-37页 |
| 4.5.3 △Cg4LysM对碳源的利用 | 第37页 |
| 4.5.4 △Cg4LysM的玻璃纸机械穿透力分析 | 第37-38页 |
| 4.6 △Cg4LysM对橡胶树叶片的致病性分析 | 第38-39页 |
| 5 讨论 | 第39-40页 |
| 6 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-46页 |
| 附录 | 第46-51页 |
| 致谢 | 第51页 |
