| 中文摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 中文文摘 | 第6-12页 |
| 绪论 | 第12-26页 |
| 一 天然免疫信号通路的激活 | 第12-18页 |
| 1. TLRs家族 | 第12-16页 |
| 1.1 Toll样受体的结构和分布 | 第13页 |
| 1.2 TLRs的配体 | 第13-14页 |
| 1.3 TLRs的信号转导 | 第14-16页 |
| 1.3.1 依赖于MyD88的信号转导途径 | 第14-15页 |
| 1.3.2 非依赖于MyD88的信号转导途径 | 第15-16页 |
| 2. RLR家族 | 第16-18页 |
| 2.1 RLRs的结构和功能 | 第17页 |
| 2.2 RLRs对病毒RNA的识别和信号转导机制 | 第17-18页 |
| 二 MAVS的研究概述 | 第18-26页 |
| 1. MAVS结构、功能与细胞定位 | 第18-20页 |
| 1.1 MAVS的结构、功能 | 第18-19页 |
| 1.2 MAVS在细胞中的定位 | 第19-20页 |
| 2. MAVS的信号转导机制 | 第20-22页 |
| 2.1 MAVS激活转录因子NF-κB | 第20-22页 |
| 2.2 MAVS激活转录因子IRF3 and IRF7 | 第22页 |
| 3. MAVS信号转导的负调节机制 | 第22-23页 |
| 3.1 阻碍MAVS和其它免疫蛋白结合 | 第22-23页 |
| 3.2 病毒酶切MAVS的活性部位 | 第23页 |
| 4. 单克隆抗体的研究 | 第23-24页 |
| 5. 本实验的研究内容和意义 | 第24-26页 |
| 第一章 线粒体抗病毒信号蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第26-40页 |
| 1.1 前言 | 第26页 |
| 1.2 材料 | 第26-27页 |
| 1.2.1 实验材料 | 第26页 |
| 1.2.2 实验试剂 | 第26-27页 |
| 1.2.3 主要仪器 | 第27页 |
| 1.3 方法 | 第27-33页 |
| 1.3.1 HMAVS基因序列的分析 | 第27页 |
| 1.3.2 293T细胞的培养、诱导表达以及总RNA的提取 | 第27-28页 |
| 1.3.3 HMAVS基因的克隆表达 | 第28页 |
| 1.3.4 HMAVSt基因的亚克隆 | 第28-30页 |
| 1.3.5 GST-HMAVSt融合蛋白的诱导表达、纯化 | 第30-31页 |
| 1.3.6 重组蛋白的十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析 | 第31页 |
| 1.3.7 重组蛋白的透析及浓度测定 | 第31页 |
| 1.3.8 重组蛋白rHMAVSt免疫鼠血清的制备 | 第31-32页 |
| 1.3.9 293T细胞表达天然HMAVS蛋白的免疫印迹试验(Western blotting)分析 | 第32-33页 |
| 1.4 结果 | 第33-38页 |
| 1.4.1 HMAVS基因的开放阅读框及氨基酸序列分析 | 第33-34页 |
| 1.4.2 HMAVS基因的克隆表达结果 | 第34页 |
| 1.4.3 HMAVSt基因的扩增结果分析 | 第34-35页 |
| 1.4.4 重组质粒pGEX-4T-1/HMAVSt的双酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 1.4.5 重组蛋白rHMAVSt表达结果的SDS-PAGE分析 | 第36-37页 |
| 1.4.6 293T细胞天然HMAVS的表达情况检测 | 第37-38页 |
| 1.5 讨论 | 第38-40页 |
| 第二章 抗rHMAVSt单克隆抗体的制备 | 第40-52页 |
| 2.1 前言 | 第40页 |
| 2.2 材料 | 第40-41页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第40页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第40页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第40-41页 |
| 2.3 实验方法 | 第41-46页 |
| 2.3.1 BALB/c小鼠的免疫 | 第41页 |
| 2.3.2 酶联免疫吸附试验(ELISA)测定免疫小鼠血清效价 | 第41页 |
| 2.3.3 BALB/c小鼠取脾前的加强免疫 | 第41-42页 |
| 2.3.4 制备饲养层细胞 | 第42页 |
| 2.3.5 骨髓瘤细胞的准备 | 第42页 |
| 2.3.6 脾淋巴细胞的准备 | 第42-43页 |
| 2.3.7 脾细胞和骨髓瘤细胞的融合 | 第43页 |
| 2.3.8 阳性杂交瘤细胞株的筛选 | 第43-44页 |
| 2.3.9 阳性杂交瘤细胞株的有限稀释 | 第44-45页 |
| 2.3.10 阳性杂交瘤细胞上清的Western blotting检测 | 第45页 |
| 2.3.11 单抗腹水的大量制备 | 第45-46页 |
| 2.4 实验结果 | 第46-50页 |
| 2.4.1 BALB/c小鼠的血清效价检测 | 第46-48页 |
| 2.4.2 IFAT检测阳性杂交瘤细胞上清和天然MAVS蛋白的结合 | 第48页 |
| 2.4.3 阳性杂交瘤细胞上清的Western blotting分析结果 | 第48-49页 |
| 2.4.4 小鼠单抗腹水与293T细胞天然HMAVS蛋白的免疫反应 | 第49-50页 |
| 2.5 讨论 | 第50-52页 |
| 第三章 HMAVS基因真核表达质粒的构建和检测 | 第52-60页 |
| 3.1 前言 | 第52页 |
| 3.2 材料 | 第52页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第52页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第52页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第52页 |
| 3.3 方法 | 第52-54页 |
| 3.3.1 HMAVS基因引物的设计与合成 | 第52-53页 |
| 3.3.2 重组载体pGEX-4T-2/HMAVS的获得 | 第53页 |
| 3.3.3 HMAVS基因的扩增、提取与纯化 | 第53页 |
| 3.3.4 重组质粒的构建和双酶切鉴定 | 第53页 |
| 3.3.5 重组质粒转染293T细胞 | 第53-54页 |
| 3.3.6 Western blotting鉴定重组蛋白的表达 | 第54页 |
| 3.4 结果与分析 | 第54-57页 |
| 3.4.1 HMAVS基因的PCR扩增结果 | 第54-55页 |
| 3.4.2 重组质粒pcDNA3.1/HisA-HMAVS双酶切鉴定结果 | 第55-56页 |
| 3.4.3 Western blotting鉴定重组质粒的表达 | 第56-57页 |
| 3.5 讨论 | 第57-60页 |
| 结论 | 第60-62页 |
| 附录1 pGEX-4T-1和pGEX-4T-2的基因图谱 | 第62-63页 |
| 附录2 pcDANA3.1/HisA的基因图谱 | 第63-64页 |
| 附录3 主要试剂配方 | 第64-66页 |
| 附录4 英文缩略词表 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78-80页 |
| 个人简历 | 第80-84页 |
