| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第8-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1 布鲁氏菌病的危害及其病原学特征 | 第12-13页 |
| 2 布鲁氏菌的致病机理 | 第13-15页 |
| 3 细菌sRNA的分类和功能 | 第15-17页 |
| 4 细菌sRNA的筛选、鉴定及靶基因的预测 | 第17-20页 |
| 4.1 细菌sRNA的筛选与鉴定方法 | 第17-19页 |
| 4.2 sRNA靶基因的生物信息学预测 | 第19-20页 |
| 5 布鲁氏菌sRNA的研究现状 | 第20-21页 |
| 6 本研究的目的意义 | 第21-22页 |
| 第二章 布鲁氏菌胞内生存相关sRNA的筛选 | 第22-36页 |
| 1 材料 | 第22-24页 |
| 1.1 菌株及培养基 | 第22-23页 |
| 1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 1.3 试验仪器 | 第23页 |
| 1.4 引物 | 第23-24页 |
| 2 方法 | 第24-27页 |
| 2.1 布鲁氏菌sRNA的筛选 | 第24-25页 |
| 2.2 不同刺激条件下布鲁氏菌sRNA的RT-PCR鉴定 | 第25-26页 |
| 2.2.1 提取不同体外刺激条件下16M总RNA | 第25-26页 |
| 2.2.2 Dnase Ⅰ处理 | 第26页 |
| 2.2.3 cDNA第一链的合成 | 第26页 |
| 2.2.4 RT-PCR鉴定 | 第26页 |
| 2.3 布鲁氏菌sRNA靶基因的预测 | 第26-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-33页 |
| 3.1 布鲁氏菌sRNA的筛选 | 第27-29页 |
| 3.1.1 16M转录组的测序数据分析 | 第27-28页 |
| 3.1.2 候选sRNA的特征 | 第28-29页 |
| 3.2 体外刺激条件下16M sRNA的RT-PCR鉴定 | 第29-31页 |
| 3.3 布鲁氏菌sRNA(Candidate_1069)靶基因的预测 | 第31-33页 |
| 4 讨论 | 第33-36页 |
| 4.1 布鲁氏菌sRNA的筛选 | 第33-35页 |
| 4.2 布鲁氏菌sRNA的RT-PCR验证 | 第35页 |
| 4.3 布鲁氏菌sRNA(Candidae_1069)靶基因的预测 | 第35-36页 |
| 第三章 布鲁氏菌非编码小RNA BSR0441功能的初步研究 | 第36-60页 |
| 1 材料 | 第36-39页 |
| 1.1 菌株、细胞系、载体及培养基 | 第36页 |
| 1.2 试验动物 | 第36-37页 |
| 1.3 主要试剂 | 第37页 |
| 1.4 试验仪器 | 第37-38页 |
| 1.5 引物 | 第38-39页 |
| 2 方法 | 第39-45页 |
| 2.1 BSR0441的Northern Blot验证 | 第39-40页 |
| 2.1.1 DIG-BSR0441探针的制备 | 第39页 |
| 2.1.2 Northern Blot验证 | 第39-40页 |
| 2.2 BSR0441在体外以及体内的转录分析 | 第40-41页 |
| 2.2.1 BSR0441在体外不同生长时期的转录 | 第40页 |
| 2.2.2 BSR0441在细胞内的转录 | 第40-41页 |
| 2.2.3 BSR0441在小鼠体内的转录 | 第41页 |
| 2.3 BSR0441突变株和过表达株的构建 | 第41-44页 |
| 2.3.1 BSR0441突变株的构建 | 第41-43页 |
| 2.3.2 BSR0441过表达株的构建 | 第43页 |
| 2.3.3 BSR0441突变株和过表达株的RT-PCR验证 | 第43-44页 |
| 2.4 BSR0441突变株和过表达株的表型分析 | 第44-45页 |
| 2.4.1 16M、16M-△BSR0441和16M-BSR0441的生长曲线测定 | 第44页 |
| 2.4.2 16M、16M-△BSR0441和16M-BSR0441的体外应激试验 | 第44页 |
| 2.4.3 16M、16M-△BSR0441和16M-BSR0441的细胞侵染试验 | 第44页 |
| 2.4.4 16M、16M-△BSR0441和16M-BSR0441的小鼠毒力试验 | 第44-45页 |
| 2.5 BSR0441重要靶基因的qRT-PCR分析 | 第45页 |
| 2.5.1 细胞内靶标基因的qRT-PCR | 第45页 |
| 2.5.2 小鼠体内靶标基因的qRT-PCR | 第45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-56页 |
| 3.1 BSR0441的Northern Blot验证 | 第45-46页 |
| 3.2 BSR0441的转录分析 | 第46-48页 |
| 3.2.1 BSR0441在体外不同生长时期的转录 | 第46页 |
| 3.2.2 BSR0441在细胞内的转录 | 第46-47页 |
| 3.2.3 BSR0441在小鼠体内的转录 | 第47-48页 |
| 3.3 BSR0441突变株和过表达株的构建 | 第48-51页 |
| 3.3.1 BSR0441突变株的构建与鉴定 | 第48-49页 |
| 3.3.2 BSR0441过表达株的构建与鉴定 | 第49-50页 |
| 3.3.3 BSR0441突变株和过表达株的RT-PCR验证 | 第50-51页 |
| 3.4 BSR0441突变株和过表达株的表型分析 | 第51-53页 |
| 3.4.1 16M、16M-△BSR0441和16M-BSR0441的生长曲线 | 第51页 |
| 3.4.2 16M、16M-△BSR0441和16M-BSR0441的体外应激试验 | 第51-52页 |
| 3.4.3 16M、16M-△BSR0441和16M-BSR0441的细胞侵染试验 | 第52-53页 |
| 3.4.4 16M、16M-△BSR0441和16M-BSR0441的小鼠毒力试验 | 第53页 |
| 3.5 BSR0441重要靶基因的qRT-PCR分析 | 第53-56页 |
| 3.5.1 感染细胞期间BSR0441对靶标基因的作用 | 第54-55页 |
| 3.5.2 体内感染情况下BSR0441对靶标基因的作用 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-60页 |
| 4.1 BSR0441的验证 | 第56-57页 |
| 4.2 BSR0441突变株和过表达株的构建 | 第57-58页 |
| 4.3 BSR0441相关毒力表型分析 | 第58页 |
| 4.4 BSR0441对其靶基因的调控作用 | 第58-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第70-71页 |
