| 中文摘要 | 第18-23页 |
| ABSTRACT | 第23-28页 |
| 符号说明 | 第29-31页 |
| 前言 | 第31-41页 |
| 一、sIRNA与药物联用 | 第32-34页 |
| 1. 将siRNA和药物分别装载于不同载体联合用药 | 第32-33页 |
| 2. 将siRNA与药物装载于同一载体联合给药 | 第33-34页 |
| 二、sIRNA与药物共载载体 | 第34-36页 |
| 1. 脂质体/脂质纳米粒 | 第34-35页 |
| 2. 阳离子聚合物/胶束 | 第35页 |
| 3. 无机纳米粒 | 第35-36页 |
| 三、肿瘤定位释放 | 第36-37页 |
| 1. 定位释放策略 | 第36-37页 |
| 2. pH刺激响应策略 | 第37页 |
| 四、课题设计 | 第37-41页 |
| 第一章 索拉非尼阳离子脂质体的制备和表征 | 第41-58页 |
| 一、实验材料 | 第41-42页 |
| 1. 试剂与药品 | 第41页 |
| 2. 仪器 | 第41-42页 |
| 二、实验方法 | 第42-45页 |
| 1. 索拉非尼含量测定方法的建立 | 第42-43页 |
| 1.1 检测波长的确定 | 第42页 |
| 1.2 色谱条件 | 第42页 |
| 1.3 专属性实验 | 第42-43页 |
| 1.4 检测限和定量限 | 第43页 |
| 1.5 标准曲线的建立 | 第43页 |
| 1.6 精密度考察 | 第43页 |
| 1.7 回收率实验 | 第43页 |
| 2. 包封率测定方法的建立 | 第43-44页 |
| 2.1 索拉非尼在0.4%吐温-80 PBS溶液中饱和溶解度的确定 | 第44页 |
| 2.2 回收率测定 | 第44页 |
| 2.3 包封率和载药量的计算 | 第44页 |
| 3. Sf-CL的制备和处方筛选 | 第44-45页 |
| 3.1 处方单因素考察 | 第45页 |
| 3.2 Sf与DOPE比例 | 第45页 |
| 3.3 Cholesterol与DOPE比例 | 第45页 |
| 3.4 DOTAP与DOPE比例 | 第45页 |
| 3.5 最优处方验证及理化性质 | 第45页 |
| 三、实验结果 | 第45-56页 |
| 1. 索拉非尼含量测定方法考察结果 | 第46-50页 |
| 1.1 索拉非尼检测波长的确立 | 第46页 |
| 1.2 专属性考察 | 第46-47页 |
| 1.3 最低检测限和最低定量限 | 第47页 |
| 1.4 标准曲线的建立 | 第47-48页 |
| 1.5 精密度考察 | 第48-49页 |
| 1.6 回收率考察 | 第49-50页 |
| 2. 包封率测定方法考察结果 | 第50-51页 |
| 1.1 索拉非尼在0.4%吐温-80 PBS溶液中饱和溶解度 | 第50页 |
| 1.2 加样回收率考察结果 | 第50-51页 |
| 3. 处方单因素考察 | 第51-56页 |
| 3.1 Sf与DOPE比例考察 | 第51-52页 |
| 3.2 Cholesterol与DOPE比例考察 | 第52-53页 |
| 3.3 DOTAP与DOPE比例考察 | 第53-54页 |
| 3.4 最优处方验证和理化性质 | 第54-56页 |
| 四、讨论 | 第56-57页 |
| 五、小结 | 第57-58页 |
| 第二章 pH敏感索拉非尼和siRNA共载脂质体的制备与表征 | 第58-79页 |
| 一、实验材料 | 第58-59页 |
| 1. 试剂与药品 | 第58-59页 |
| 2. 仪器 | 第59页 |
| 3. 溶液的配制 | 第59页 |
| 二、实验方法 | 第59-63页 |
| 1. SiSf-CL的制备 | 第59-60页 |
| 2. CMCS-SiSf-CL的制备 | 第60页 |
| 3. 处方考察 | 第60-61页 |
| 3.1 琼脂糖凝胶电泳的制备 | 第60页 |
| 3.2 激光粒度分析及Zeta电位分析 | 第60页 |
| 3.3 SiSf-CL最优处方的确定 | 第60-61页 |
| 3.4 CMCS-SiSf-CL最优处方的确定 | 第61页 |
| 4. 最优处方理化性质考察 | 第61页 |
| 5. 初步稳定性考察 | 第61-62页 |
| 5.2 血清中稳定性 | 第61页 |
| 5.3 抗核酸酶降解能力 | 第61-62页 |
| 5.4 血浆稳定性 | 第62页 |
| 5.5 存储稳定性 | 第62页 |
| 6. CMCS pH敏感实验 | 第62页 |
| 7. 索拉非尼体外释放行为考察 | 第62-63页 |
| 7.1 体外释放方法学建立 | 第62页 |
| 7.2 不同pH释放介质中标准曲线测定 | 第62-63页 |
| 7.3 不同pH释放介质中精密度测定 | 第63页 |
| 7.4 不同pH释放介质中回收率测定 | 第63页 |
| 7.5 pH敏感释放测定 | 第63页 |
| 三、实验结果 | 第63-76页 |
| 1. SiSf-CL的制备 | 第63-65页 |
| 2. CMCS-SiSf-CL的制备 | 第65-66页 |
| 3. 最优处方理化性质考察 | 第66-67页 |
| 4. 初步稳定性考察 | 第67-69页 |
| 4.1 血清中稳定性 | 第67页 |
| 4.2 抗核酸酶降解能力 | 第67-68页 |
| 4.3 血浆稳定性 | 第68-69页 |
| 4.4 存储稳定性 | 第69页 |
| 5. CMCS pH敏感性测定 | 第69-70页 |
| 6. CMCS-SiSf-CL体外释放 | 第70-75页 |
| 6.1 体外释放方法学考察 | 第70-75页 |
| 6.1.1 不同pH释放介质中标准曲线测定 | 第70-72页 |
| 6.1.2 不同pH释放介质中精密度测定 | 第72-74页 |
| 6.1.3 不同pH释放介质中回收率测定 | 第74-75页 |
| 6.2 不同pH释放介质中索拉非尼体外释放行为测定 | 第75-76页 |
| 四、讨论 | 第76-78页 |
| 五、小结 | 第78-79页 |
| 第三章 pH敏感索拉非尼和siRNA共载脂质体的siRNA体内外分布和索拉非尼抗肿瘤能力研究 | 第79-93页 |
| 一、实验材料 | 第79-80页 |
| 1. 试剂与药品 | 第79-80页 |
| 2. 仪器 | 第80页 |
| 3. 实验细胞 | 第80页 |
| 4. 实验动物 | 第80页 |
| 二、实验方法 | 第80-82页 |
| 1. 细胞摄取实验 | 第80-81页 |
| 2. 细胞毒性实验 | 第81页 |
| 3. 活体成像观察 | 第81页 |
| 4. 肿瘤组织冰冻切片 | 第81-82页 |
| 5. Sf体内抗肿瘤能力评价 | 第82页 |
| 6. 组织切片观察 | 第82页 |
| 三、实验结果 | 第82-90页 |
| 1. 细胞摄取考察 | 第82-84页 |
| 2. 细胞毒性考察 | 第84-85页 |
| 3. siRNA肿瘤蓄积考察 | 第85-87页 |
| 4. Sf体内抗肿瘤能力评价 | 第87-90页 |
| 四、讨论 | 第90-92页 |
| 五、小结 | 第92-93页 |
| 第四章 pH敏感索拉非尼和siRNA共载脂质体体内外共递送研究 | 第93-106页 |
| 一、实验材料 | 第93-94页 |
| 1. 试剂与药品 | 第93-94页 |
| 2. 仪器 | 第94页 |
| 3. 实验细胞 | 第94页 |
| 4. 实验动物 | 第94页 |
| 二、实验方法 | 第94-96页 |
| 1. 体外二维培养细胞共递送实验 | 第94-95页 |
| 2. 胞内命运和溶酶体逃逸 | 第95页 |
| 3. 体外三维肿瘤球形成实验 | 第95-96页 |
| 4. 体外三维肿瘤球渗透实验 | 第96页 |
| 5. 体内肿瘤组织共递送实验 | 第96页 |
| 三、实验结果 | 第96-103页 |
| 1. 体外二维培养细胞pH敏感共递送实验 | 第97页 |
| 2. 胞内过程和溶酶体逃逸 | 第97-99页 |
| 3. 体外三维肿瘤球形成实验 | 第99页 |
| 4. 体外三维肿瘤球渗透实验 | 第99-102页 |
| 5. 体内肿瘤组织共递送实验 | 第102-103页 |
| 四、讨论 | 第103-104页 |
| 五、小结 | 第104-106页 |
| 第五章 .pH敏感索拉非尼和VEGF-siRNA共递送脂质体体外抑制肝细胞癌评价 | 第106-123页 |
| 一、实验材料 | 第106-110页 |
| 1. 试剂与药品 | 第107-108页 |
| 2. 仪器 | 第108页 |
| 3. 溶液的配制 | 第108-110页 |
| 3.1 10×SDS-PAGE电泳缓冲液 | 第108页 |
| 3.2 5%浓缩胶 | 第108-109页 |
| 3.3 10%分离胶 | 第109页 |
| 3.4 10×转膜缓冲液 | 第109页 |
| 3.5 转膜缓冲液 | 第109页 |
| 3.6 10×TBS缓冲液 | 第109-110页 |
| 3.7 TBST缓冲液 | 第110页 |
| 3.8 封闭液 | 第110页 |
| 4. 实验细胞 | 第110页 |
| 二、实验方法 | 第110-115页 |
| 1. 细胞VEGF基因水平表达测定 | 第110-113页 |
| 1.1 siRNA转染剂量筛选 | 第110页 |
| 1.2 实验分组和转染 | 第110-111页 |
| 1.3 总RNA提取 | 第111页 |
| 1.4 cDNA第一链合成 | 第111-112页 |
| 1.5 Realtime PCR测定 | 第112-113页 |
| 2. 细胞内VEGF蛋白水平测定 | 第113-114页 |
| 3. 细胞毒性考察 | 第114页 |
| 4. 细胞凋亡实验 | 第114-115页 |
| 5. 细胞周期实验 | 第115页 |
| 三、实验结果 | 第115-121页 |
| 1. 细胞VEGF基因水平表达测定 | 第115-117页 |
| 2. 细胞内VEGF蛋白水平测定 | 第117页 |
| 3. 细胞毒性考察 | 第117-118页 |
| 4. 细胞凋亡考察 | 第118-120页 |
| 5. 细胞周期考察 | 第120-121页 |
| 四、讨论 | 第121-122页 |
| 五、小结 | 第122-123页 |
| 全文总结与展望 | 第123-127页 |
| 一、结论 | 第123-125页 |
| 二、创新点 | 第125页 |
| 三、展望 | 第125-127页 |
| 参考文献 | 第127-140页 |
| 致谢 | 第140-141页 |
| 攻读学位期间发表文章 | 第141-142页 |
| 附件 | 第142-160页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第160页 |
