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EHEC O157:H7紧密素单克隆抗体的制备及夹心ELISA检测方法的建立

摘要第1-9页
ABSTRACT第9-11页
英文缩略表(Abbreviation)第11-13页
第一篇 文献综述第13-35页
 1. EHEC O157:H7的主要毒力因子第13-17页
   ·紧密素第13-14页
   ·志贺毒素第14-16页
   ·溶血素和致病性质粒编码的其他毒力基因第16页
   ·脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)第16-17页
 2 O157:H7的流行病学第17-19页
   ·流行病学特点第17页
   ·流行情况第17-19页
 3 临床特征第19页
 4 致病机制第19-22页
   ·A/E损伤第19-21页
   ·产生志贺毒素和溶血素第21页
   ·炎症第21-22页
 5 EHEC O157:H7检测方法第22-27页
   ·常规性检测方法第22-23页
   ·血清学检测方法第23页
   ·免疫学检测第23-25页
   ·分子生物学检测方法第25-27页
 6 防控策略第27-28页
 参考文献第28-35页
第二篇 试验研究第35-71页
 第一章 EHEC O157:H7紧密素(intimin)单克隆抗体的制备与鉴定第35-51页
  1 材料第36-37页
   ·菌株第36页
   ·试验动物及细胞第36页
   ·试验主要试剂和仪器第36-37页
  2 方法第37-42页
   ·抗原的制备第37页
   ·免疫动物第37-38页
   ·细胞融合第38-39页
   ·间接ELISA最佳抗原包被浓度和血清稀释倍数的确定第39-40页
   ·阳性杂交瘤细胞株的筛选第40页
   ·阳性杂交瘤细胞的克隆化第40页
   ·阳性杂交瘤细胞的冻存和复苏第40-41页
   ·MAb腹水的制备第41页
   ·间接ELISA方法检测单克隆抗体特异性及单抗对EHEC O157:H7的初步检测第41页
   ·单克隆抗体活性鉴定第41-42页
   ·杂交瘤细胞分泌抗体的稳定性鉴定第42页
   ·腹水敏感性测定第42页
  3 结果第42-47页
   ·Intimin重组蛋白的表达、纯化第42-43页
   ·细胞融合率、阳性率与细胞克隆第43页
   ·间接ELISA方法的建立第43-44页
   ·间接ELISA方法检测单克隆抗体特异性及单抗对EHEC O157:H7的初步检测第44-45页
   ·单抗对intimin最小检出限的初步测定第45-46页
   ·Western-blot检测第46-47页
  4 讨论第47-49页
  参考文献第49-51页
 第二章 EHEC O157双抗体夹心ELISA检测方法的建立第51-71页
  1 材料第51-52页
   ·菌株与实验动物第51-52页
   ·抗体第52页
   ·主要试剂及仪器第52页
  2 方法第52-56页
   ·兔抗EHEC O157:H7高免血清制备第52-53页
   ·兔抗EHEC O157:H7高免血清的纯化第53页
   ·提纯腹水、多抗效价和浓度测定第53-54页
   ·双抗体夹心ELISA方法最适反应条件的确定第54-55页
   ·特异性试验第55-56页
   ·敏感性试验第56页
   ·重复性试验第56页
   ·阴阳临界值的确定第56页
  3 结果第56-67页
   ·兔抗高免血清效价、纯度及浓度测定第56-58页
   ·双夹心ELISA方法最适反应条件的确定第58-65页
   ·特异性试验第65页
   ·敏感性试验第65-66页
   ·重复性试验第66-67页
   ·阴阳临界值的确定第67页
  4 讨论第67-69页
  参考文献第69-71页
全文总结第71-73页
附录:常用试剂的配制第73-75页
硕士期间发表文章第75-77页
致谢第77页

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