| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-24页 |
| ·趋化因子及其受体简介 | 第11-14页 |
| ·趋化因子的结构与功能 | 第11-12页 |
| ·趋化因子受体的结构与功能 | 第12-14页 |
| ·趋化因子及其受体对乳腺癌的调节作用 | 第14-18页 |
| ·趋化因子及其受体对乳腺癌生长的调节 | 第14-15页 |
| ·趋化因子及其受体对乳腺癌增殖的调节 | 第15-16页 |
| ·趋化因子及其受体对乳腺癌转移的调节 | 第16-17页 |
| ·趋化因子及其受体与乳腺癌的预后与治疗 | 第17-18页 |
| ·趋化因子受体CXCR4在乳腺癌中的研究现状 | 第18-24页 |
| ·CXCR4简介 | 第18-20页 |
| ·CXCR4对乳腺癌的作用 | 第20-22页 |
| ·CXCR4与乳腺癌的预后与治疗 | 第22-24页 |
| 第二章 双荧光报告基因载体的构建 | 第24-46页 |
| ·试验材料 | 第24-26页 |
| ·试验主要化学试剂 | 第24页 |
| ·试验主要仪器 | 第24-25页 |
| ·耗材 | 第25页 |
| ·软件及网络资源 | 第25页 |
| ·实验相关质粒和引物 | 第25-26页 |
| ·试验方法 | 第26-35页 |
| ·扩增绿色荧光载体EGFP-N1上的CMV启动子 | 第26-28页 |
| ·去除EGFP-N1多克隆位点的绿色荧光蛋白报告基因载体的构建 | 第28-29页 |
| ·扩增红色荧光蛋白载体mCherry-N1上的mCherry polyA signal片段 | 第29-31页 |
| ·含有mCherry polyA signal绿色荧光蛋白报告基因载体的构建 | 第31-32页 |
| ·扩增pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro载体上的上EFI启动子 | 第32-33页 |
| ·含有EFI启动子的双荧光蛋白报告基因载体的构建 | 第33-34页 |
| ·细胞转染 | 第34-35页 |
| ·试验结果与分析 | 第35-46页 |
| ·上下游含有多克隆位点CMV启动子的扩增 | 第35-36页 |
| ·目的基因和报告基因载体的双酶切 | 第36页 |
| ·pluspEGFP-N1重组载体的PCR检测及测序 | 第36-38页 |
| ·mCherry和多聚腺苷酸尾巴的扩增 | 第38页 |
| ·mCherry polyA和pluspEGFP-N1的双酶切 | 第38-39页 |
| ·mCherry-pluspEGFP-N1重组载体的PCR检测及测序 | 第39-41页 |
| ·EFI的扩增 | 第41页 |
| ·EFI启动子与pmCherry- pluspEGFP-N1的双酶切 | 第41-42页 |
| ·pEF1-pmCherry-pluspEGFP-N1载体的PCR检验及测序 | 第42-44页 |
| ·pEF1-pmCherry-pluspEGFP-N1双荧光报告基因载体的构建 | 第44-45页 |
| ·双荧光蛋白报告载体活性的共聚焦荧光显微镜检测 | 第45-46页 |
| 第三章 CXCR4启动子驱动的双荧光报告基因载体构建 | 第46-64页 |
| ·试验材料 | 第46-47页 |
| ·细胞系 | 第46页 |
| ·试验主要试剂与耗材 | 第46页 |
| ·试验主要仪器 | 第46-47页 |
| ·CXCR4启动子引物 | 第47页 |
| ·试验方法 | 第47-53页 |
| ·细胞复苏 | 第47页 |
| ·细胞传代培养 | 第47-48页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第48页 |
| ·细胞基因组DNA完整性检测 | 第48页 |
| ·CXCR4启动子的扩增 | 第48-50页 |
| ·CXCR4启动子驱动的双荧光报告基因载体构建 | 第50-52页 |
| ·细胞转染 | 第52-53页 |
| ·荧光蛋白活性的共聚焦显微镜检测 | 第53页 |
| ·试验结果与分析 | 第53-64页 |
| ·基因组DNA提取结果 | 第53-54页 |
| ·CXCR4启动子的扩增 | 第54-55页 |
| ·CXCR4启动子和pEF1-pmCherry- pluspEGFP-N1载体的双酶切 | 第55-56页 |
| ·CXCR4启动子驱动的双荧光报告基因载体的双酶切检验及测序 | 第56-60页 |
| ·CXCR4启动子驱动的双荧光蛋白报告载体活性的共聚焦荧光显微镜检测 | 第60-61页 |
| ·CXCR4启动子转录结合位点分析 | 第61-64页 |
| 第四章 CXCR4阳性细胞与CXCR4阴性细胞的分选及体外培养 | 第64-69页 |
| ·流式细胞仪分选CXCR4阳性细胞和阴性细胞 | 第64-66页 |
| ·细胞的体外观察培养 | 第66-67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 附录 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
