| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-16页 |
| ·苯酚概况 | 第10-11页 |
| ·苯酚的性质及应用领域 | 第10页 |
| ·苯酚的市场情况 | 第10-11页 |
| ·苯酚的化学合成方法 | 第11页 |
| ·甘油性质及应用 | 第11页 |
| ·苯酚的生物合成方法 | 第11-14页 |
| ·甘油代谢途径的研究 | 第11-13页 |
| ·葡萄糖代谢生产苯酚的途径 | 第13-14页 |
| ·生产菌种 | 第14页 |
| ·苯酚生物合成的研究现状 | 第14页 |
| ·本课题的研究内容与研究方案 | 第14-16页 |
| 第二章 TPL基因密码子优化及在大肠杆菌中的异源表达 | 第16-24页 |
| ·引言 | 第16-17页 |
| ·实验材料 | 第17-18页 |
| ·菌株与质粒 | 第17页 |
| ·培养基 | 第17页 |
| ·主要试剂及仪器设备 | 第17-18页 |
| ·实验方法 | 第18-21页 |
| ·TPL密码子优化及基因合成 | 第18-19页 |
| ·重组质粒转化E.coli BL21（DE3）及转化子筛选 | 第19页 |
| ·蛋白的表达与纯化 | 第19-20页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳分析 | 第20-21页 |
| ·TPL酶活力的HPLC检测 | 第21页 |
| ·结果与分析 | 第21-23页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳分析 | 第21-22页 |
| ·TPL酶活力的高效液相检测 | 第22-23页 |
| ·本章小结 | 第23-24页 |
| 第三章 利用甘油生产苯酚代谢途径的构建 | 第24-33页 |
| ·引言 | 第24页 |
| ·实验材料 | 第24-26页 |
| ·菌株与质粒 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·主要试剂及仪器设备 | 第24-26页 |
| ·实验方法 | 第26-30页 |
| ·引物设计 | 第26页 |
| ·PCR克隆TPL和P4M的DNA片段 | 第26-27页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第27-28页 |
| ·PCR产物胶回收 | 第28页 |
| ·重组质粒pTrc99a-TPL的构建 | 第28-29页 |
| ·重组质粒pTrc99a-TPL-P4M的构建 | 第29页 |
| ·E.coli ATCC31884电转化感受态细胞的制备及转化 | 第29-30页 |
| ·重组菌株发酵培养 | 第30页 |
| ·目标产物苯酚的HPLC检测 | 第30页 |
| ·结果与讨论 | 第30-32页 |
| ·PCR克隆基因片段 | 第30-31页 |
| ·重组质粒pTrc99a-TPL-P4M的构建 | 第31页 |
| ·重组菌株PH1发酵液的HPLC检测 | 第31-32页 |
| ·本章小结 | 第32-33页 |
| 第四章 甘油利用基因表达水平的增强 | 第33-44页 |
| ·引言 | 第33页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·菌株与质粒 | 第33页 |
| ·培养基 | 第33页 |
| ·主要试剂及仪器设备 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-38页 |
| ·引物设计 | 第33-34页 |
| ·E.coli ATCC31884基因组DNA的提取 | 第34页 |
| ·DNA的PCR扩增 | 第34-36页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第36页 |
| ·PCR产物胶回收 | 第36页 |
| ·重组质粒pTrc99a-TPL-P4M-trcGlpX-Tkt A的构建 | 第36-37页 |
| ·重组质粒转化E.coli ATCC31884感受态细胞 | 第37页 |
| ·重组菌株发酵培养 | 第37-38页 |
| ·目标产物苯酚的HPLC检测 | 第38页 |
| ·重组质粒pTrc99a-TPL-trcP4M-trcGlpX-TktA的构建 | 第38页 |
| ·重组质粒转化E.coli ATCC31884感受态细胞 | 第38页 |
| ·重组菌株发酵培养 | 第38页 |
| ·目标产物苯酚的HPLC检测 | 第38页 |
| ·结果与讨论 | 第38-43页 |
| ·E.coli ATCC31884基因组DNA的提取 | 第38-39页 |
| ·PCR克隆基因片段 | 第39-40页 |
| ·重组质粒pTrc99a-TPL-P4M-trcGlpX-TktA的构建 | 第40-41页 |
| ·重组质粒pTrc99a-TPL-trcP4M-trcGlpX-TktA的构建 | 第41-42页 |
| ·重组菌株PH1和PH2发酵液的HPLC检测 | 第42-43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 第五章 增加莽草酸途经中磷酸烯醇式丙酮酸的供应 | 第44-57页 |
| ·引言 | 第44页 |
| ·实验材料 | 第44-45页 |
| ·菌株与质粒 | 第44页 |
| ·培养基 | 第44-45页 |
| ·主要试剂及仪器设备 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-51页 |
| ·引物设计 | 第45-46页 |
| ·pykF基因敲除 | 第46-48页 |
| ·质粒转化ATph1感受态细胞 | 第48页 |
| ·PH4重组菌株发酵培养 | 第48页 |
| ·目标产物苯酚的HPLC检测 | 第48页 |
| ·ptsI基因敲除 | 第48-49页 |
| ·质粒转化ATph2感受态细胞 | 第49页 |
| ·PH5重组菌株发酵培养 | 第49页 |
| ·目标产物苯酚的HPLC检测 | 第49-50页 |
| ·ppc基因敲除 | 第50-51页 |
| ·质粒转化ATph3感受态细胞 | 第51页 |
| ·PH6重组菌株发酵培养 | 第51页 |
| ·目标产物苯酚的HPLC检测 | 第51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-56页 |
| ·pyk F基因敲除 | 第51-53页 |
| ·ptsI基因敲除 | 第53-54页 |
| ·ppc基因敲除 | 第54-56页 |
| ·重组菌株PH4、PH5和PH6发酵液的HPLC检测 | 第56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| 第六章 发酵优化 | 第57-62页 |
| ·引言 | 第57页 |
| ·实验材料 | 第57页 |
| ·菌株与质粒 | 第57页 |
| ·培养基 | 第57页 |
| ·主要试剂及仪器设备 | 第57页 |
| ·实验方法 | 第57-58页 |
| ·发酵培养基优化 | 第57-58页 |
| ·重组菌株发酵 | 第58页 |
| ·目标产物苯酚的HPLC检测 | 第58页 |
| ·双液相发酵 | 第58页 |
| ·结果与讨论 | 第58-61页 |
| ·培养基优化发酵后苯酚的HPLC检测 | 第58-59页 |
| ·双液相发酵 | 第59-61页 |
| ·本章小结 | 第61-62页 |
| 第七章 全文总结 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-66页 |
| 攻读学位期间的科研成果 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
