| 英文缩略词 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-14页 |
| 第一部分 miR-223慢病毒过表达重组载体质粒的构建及在K562细胞中的表达情况 | 第14-39页 |
| 1 材料 | 第14-18页 |
| ·细胞株 | 第14页 |
| ·慢病毒载体系统 | 第14页 |
| ·慢病毒载体构建及表达的主要试剂 | 第14-15页 |
| ·慢病毒载体构建及表达的主要仪器 | 第15页 |
| ·其他实验所需的主要试剂和主要仪器 | 第15-16页 |
| ·主要试剂的配置 | 第16-18页 |
| 2 实验方法 | 第18-23页 |
| ·PCR扩增目的基因片段 | 第18-19页 |
| ·割胶回收 | 第19-20页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第20页 |
| ·目的基因同源重组入表达载体 | 第20-22页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第22页 |
| ·阳性重组质粒的大量抽提 | 第22-23页 |
| 3 慢病毒的包装 | 第23-25页 |
| ·包装病毒 293T细胞的复苏 | 第23页 |
| ·293T细胞的传代 | 第23-24页 |
| ·阳性重组质粒的细胞转染 | 第24页 |
| ·慢病毒的收获和浓缩 | 第24-25页 |
| ·慢病毒滴度测定 | 第25页 |
| 4 K562细胞的培养 | 第25-26页 |
| ·培养基成份 | 第25页 |
| ·细胞培养操作步骤 | 第25-26页 |
| 5 miR-223慢病毒过表达载体转染K562细胞 | 第26-27页 |
| ·k562细胞的感染设GV309miR223EGFP组、GV309EGFP空载体组 | 第26-27页 |
| 6 real-time PCR检测K562细胞中miR-223、BCR-ABL mRNA表达情况 | 第27-30页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·逆转录合成cDNA | 第28-29页 |
| ·引物设计与合成 | 第29页 |
| ·miR-223基因PCR扩增荧光实时定量PCR检测miR-223、BCR-ABL基因的mRNA的表达改变 。 | 第29-30页 |
| 7 Western bloting法检测K562细胞中 融合蛋白BCR-ABL表达情况。 | 第30-32页 |
| ·细胞总蛋白的提取 | 第30页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶的制备 | 第30页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第30-31页 |
| ·电转膜 | 第31页 |
| ·丽春红染色 | 第31页 |
| ·抗体结合 | 第31-32页 |
| ·暗室曝光、显影、洗片 | 第32页 |
| 8 统计学方法 | 第32-33页 |
| 9 结果 | 第33-39页 |
| ·MiR-223基因重组阳性克隆测序结果及测序结果分析 | 第33-36页 |
| ·miR-223 过表达效率观察 | 第36-37页 |
| ·miR-223 对 K562 细胞中融合基因 BCR-ABL m RNA 表达的影响 | 第37-38页 |
| ·miR-223 对 K562 细胞内融合蛋白 BCR-ABL 表达量的影响 | 第38-39页 |
| 第二部分 过表达miR-223对K562细胞增殖的影响 | 第39-46页 |
| 1 材料和仪器 | 第39-42页 |
| ·K562细胞 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39-42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| 2 实验方法 | 第42-44页 |
| ·细胞系细胞培养 | 第42页 |
| ·通过CCK-8 法检测细胞增殖 | 第42页 |
| ·Western bloting法检测K562细胞中caspase-3、caspase-9 蛋白的表达 | 第42-43页 |
| ·统计学处理 | 第43-44页 |
| 3 实验结果 | 第44-46页 |
| ·miR-223对K562细胞生长曲线的影响 | 第44-45页 |
| ·过表达mi R-223对K562细胞凋亡相关蛋白表达的影响39讨论 | 第45-46页 |
| 讨论 | 第46-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 综述 | 第57-64页 |
| 参考文献 | 第62-64页 |
