| 摘要 | 第1-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第7-15页 |
| 1 支原体概述 | 第7页 |
| 2 肺炎支原体致病机理 | 第7-8页 |
| 3 猪肺炎支原体主要免疫原蛋白 | 第8-12页 |
| ·黏附因子P97 | 第8页 |
| ·P102蛋白 | 第8-9页 |
| ·P159蛋白 | 第9页 |
| ·其他黏附因子 | 第9-10页 |
| ·膜蛋白 | 第10-11页 |
| ·热休克蛋白 | 第11-12页 |
| ·细胞质蛋白P36 | 第12页 |
| 4 果糖1,6-二磷酸-D-醛缩酶研究进展 | 第12-15页 |
| 第二章 猪肺炎支原体FBA基因的克隆表达及鉴定 | 第15-32页 |
| 1 实验材料 | 第15-16页 |
| ·质粒和菌株 | 第15页 |
| ·主要材料与试剂 | 第15页 |
| ·试验仪器 | 第15-16页 |
| 2 实验方法 | 第16-25页 |
| ·基因获得示意图 | 第16页 |
| ·引物的设计与合成 | 第16-17页 |
| ·模板的制备 | 第17页 |
| ·Mhp/FBA基因的PCR扩增 | 第17-18页 |
| ·Mhp/FBA基因的回收纯化 | 第18-19页 |
| ·Mhp/FBA基因与pMD18-T载体的连接 | 第19页 |
| ·连接产物的转化 | 第19页 |
| ·重组质粒DNA的提取、鉴定及测序 | 第19-20页 |
| ·Mhp/FBA基因的SOE-PCR突变连接 | 第20-21页 |
| ·原核表达载体pET-28a(+)/FBA的构建 | 第21-22页 |
| ·连接产物的转化、重组质粒DNA的提取及鉴定 | 第22页 |
| ·重组质粒的诱导表达及SDS-PAGE检测 | 第22-23页 |
| ·重组蛋白的诱导时间的优化及存在形式 | 第23页 |
| ·蛋白的纯化 | 第23-24页 |
| ·表达产物的Western-blot检测 | 第24-25页 |
| 3 结果与分析 | 第25-29页 |
| ·猪肺炎支原体FBA基因的扩增 | 第25页 |
| ·Mhp/FBA基因的克隆测序 | 第25页 |
| ·Mhp/FBA基因的SOE-PCR突变 | 第25-27页 |
| ·pET-28a(+)/FBA重组质粒的构建与鉴定 | 第27页 |
| ·重组蛋白的表达及存在形式 | 第27-28页 |
| ·重组蛋白的纯化及Western-blot鉴定 | 第28-29页 |
| 4 讨论 | 第29-31页 |
| 5 小结 | 第31-32页 |
| 第三章 Mhp FBA蛋白免疫原性及活性分析 | 第32-38页 |
| 1 材料 | 第32页 |
| ·主要仪器 | 第32页 |
| ·蛋白、血清、菌株、材料及耗材 | 第32页 |
| 2 方法 | 第32-34页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第32页 |
| ·间接ELISA反应程序 | 第32-33页 |
| ·全菌蛋白制备 | 第33页 |
| ·BALB/c小鼠的免疫 | 第33页 |
| ·FBA作包被抗原检测FBA蛋白免疫小鼠抗体水平 | 第33页 |
| ·不同菌株蛋白反应试验 | 第33页 |
| ·FBA蛋白酶活性测定实验原理 | 第33-34页 |
| ·FBA重组蛋白的活性的检测实验步骤 | 第34页 |
| 3 结果 | 第34-36页 |
| ·FBA蛋白免疫小鼠抗体水平 | 第34-35页 |
| ·不同菌株蛋白反应试验 | 第35-36页 |
| ·FBA重组蛋白的活性的检测结果 | 第36页 |
| 4 讨论 | 第36-37页 |
| 5 小结 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-43页 |
| Abstract | 第43-45页 |
| 附录 | 第45-49页 |
| 致谢 | 第49页 |