| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 符号说明 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-32页 |
| 第一节 上皮间质转化(EMT) | 第13-19页 |
| ·上皮细胞可塑性和上皮间质转化 | 第13-14页 |
| ·正常上皮细胞EMT | 第14-16页 |
| ·肿瘤上皮细胞EMT | 第16页 |
| ·介导EMT的信号通路与相关的分子标志物 | 第16-19页 |
| 第二节 Kriippel-1ike factor 5(KLF5) | 第19-25页 |
| ·KLF5基因和蛋白 | 第19-20页 |
| ·KLF5的表达 | 第20-22页 |
| ·KLF5调控的生物学过程 | 第22-23页 |
| ·KLF5的蛋白修饰 | 第23-24页 |
| ·胚胎发育中的KLF5 | 第24-25页 |
| 第三节 转化生长因子β(TGF-β) | 第25-27页 |
| ·TGF-β与EMT | 第25-26页 |
| ·TGF-β抑制细胞增殖 | 第26页 |
| ·抑制增殖和促进EMT的功能转变 | 第26-27页 |
| 第四节 MicroRNA-200家族 | 第27-29页 |
| ·miR-200和EMT | 第27-28页 |
| ·miR-200的转录本和调控因子 | 第28页 |
| ·miR-200与TGF-β | 第28-29页 |
| ·miR-200和iPSCs | 第29页 |
| 第五节 肿瘤干细胞 | 第29-30页 |
| ·前列腺肿瘤干细胞与三种克隆 | 第29-30页 |
| ·肿瘤干细胞和EMT的关系 | 第30页 |
| 第六节 研究假说与要解决的关键问题 | 第30-32页 |
| ·研究假说 | 第30-31页 |
| ·要解决的关键问题 | 第31-32页 |
| 第二章 材料与方法 | 第32-56页 |
| 第一节 实验材料、试剂及主要仪器 | 第32-37页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·实验试剂 | 第33-35页 |
| ·实验仪器 | 第35-37页 |
| 第二节 实验方法 | 第37-56页 |
| ·质粒构建 | 第37-40页 |
| ·细胞培养与转染 | 第40-41页 |
| ·虫荧光素酶报告系统(Luciferase reporter assay) | 第41页 |
| ·慢病毒与逆转录病毒包装与感染 | 第41-42页 |
| ·RNA提取,mRNA和miRNA的表达检测 | 第42-44页 |
| ·Western Blotting | 第44-46页 |
| ·细胞免疫荧光染色 | 第46-47页 |
| ·小鼠饲养与前列腺组织收集 | 第47页 |
| ·石蜡切片 | 第47-48页 |
| ·组织免疫荧光染色 | 第48-49页 |
| ·裸鼠成瘤和肿瘤细胞分离 | 第49-50页 |
| ·Transwell法检测细胞迁移和浸润 | 第50页 |
| ·Oligonucleotide-pulldown检测 | 第50-51页 |
| ·染色质免疫沉淀(ChIP) | 第51-54页 |
| ·前列腺微球体实验(Prostasphere) | 第54页 |
| ·克隆检测实验(Clonal assay) | 第54-55页 |
| ·结果统计分析 | 第55-56页 |
| 第三章 结果 | 第56-89页 |
| 第一节 KLF5在TGF-β诱导的EMT过程中表达下调 | 第56-60页 |
| ·KLF5在TGF-β和EGF诱导的正常上皮细胞EMT过程中表达下调 | 第56-58页 |
| ·KLF5在TGF-β诱导的肿瘤上皮细胞EMT过程中表达下调 | 第58-59页 |
| ·蛋白降解是诱导EMT过程中KLF5表达下调的潜在原因 | 第59-60页 |
| 第二节 敲减KLF5促进正常和肿瘤上皮细胞向间质细胞转化 | 第60-67页 |
| ·敲减KLF5促进正常上皮细胞的EMT | 第60-62页 |
| ·敲减KLF5促进肿瘤上皮细胞的EMT | 第62-67页 |
| 第三节 KLF5通过调节miR-200家族调节EMT过程 | 第67-74页 |
| ·KLF5影响参与EMT过程的miRNAs | 第67-69页 |
| ·KLF5正调控miR-200a/b/c的表达 | 第69页 |
| ·KLF5通过结合miR-200家族启动子中的GC富含区调节其转录 | 第69-73页 |
| ·过表达miR-200抑制TGF-β和EGF处理及KLF5敲减诱导的EMT | 第73-74页 |
| 第四节 正常和肿瘤上皮细胞中过表达KLF5抑制EMT过程的诱导 | 第74-80页 |
| ·过表达KLF5上调miR-200抑制TGF-β/EGF诱导的HaCaT细胞EMT | 第74-76页 |
| ·过表达KLF5在前列腺细胞系中抑制TGF-β诱导EMT | 第76-80页 |
| 第五节 KLF5影响与EMT相关的前列腺肿瘤干性 | 第80-84页 |
| ·敲减KLF5抑制前列腺肿瘤干性 | 第80-82页 |
| ·过表达KLF5抑制前列腺肿瘤干性 | 第82-84页 |
| 第六节 在植入和自发小鼠肿瘤模型中的KLF5与EMT | 第84-87页 |
| ·DU145肿瘤外植体模型中过表达KLF5抑制EMT和肿瘤干性 | 第84页 |
| ·Pten敲除背景下,敲除Klf5下调miR-200表达促进EMT | 第84-87页 |
| 第七节 KLF5和miR-200在乳腺癌病理样本中的表达相关性分析 | 第87-89页 |
| 第四章 讨论 | 第89-98页 |
| 第一节 KLF5通过转录激活miR-200表达维持上皮表型 | 第89-91页 |
| 第二节 KLF5-miR-200轴的表达下调是诱导EMT必要的 | 第91-92页 |
| 第三节 可能存在多种与KLF5协同调控miR-200的转录因子 | 第92-93页 |
| 第四节 KLF5-miR-200轴可能调节细胞干性 | 第93页 |
| 第五节 KLF5对EMT调节可能具有基质依赖性 | 第93-95页 |
| 第六节 KLF5调节EMT的可能的其他机制 | 第95-96页 |
| 第七节 前列腺癌中KLF5与EMT和肿瘤干性 | 第96-98页 |
| 第五章 结论 | 第98-102页 |
| 第一节 结论 | 第98-99页 |
| 第二节 展望 | 第99-102页 |
| 参考文献 | 第102-115页 |
| 致谢 | 第115-117页 |
| 附录 | 第117-122页 |
| 个人简历、在学期间发表的论文与研究成果 | 第122-123页 |
