| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| ·病毒性出血性败血病 | 第12页 |
| ·病毒性出血性败血病病毒 | 第12-14页 |
| ·生物学特征 | 第13页 |
| ·病毒亚型 | 第13-14页 |
| ·宿主细胞 | 第14页 |
| ·流行病学调查 | 第14-16页 |
| ·疾病发现史 | 第14-15页 |
| ·发病症状 | 第15页 |
| ·传播途径 | 第15-16页 |
| ·疾病的爆发 | 第16页 |
| ·预防措施 | 第16页 |
| ·病毒检测方法的研究 | 第16-20页 |
| ·细胞培养对病毒进行鉴定 | 第17页 |
| ·免疫学检测方法 | 第17-18页 |
| ·血清中和试验 | 第17-18页 |
| ·荧光抗体试验 | 第18-19页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第18-19页 |
| ·分子生物学检测方法 | 第19-20页 |
| ·反转录聚合酶链式反应法 | 第19页 |
| ·PCR-DHPLC技术 | 第19页 |
| ·实时荧光PCR(Real-time PCR) | 第19-20页 |
| ·环介导等温扩增技术 | 第20页 |
| ·立题背景 | 第20-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-36页 |
| ·实验材料 | 第22-26页 |
| ·毒株、细胞及引物 | 第22-23页 |
| ·试验用仪器 | 第23-24页 |
| ·主要实验药品及试剂 | 第24-25页 |
| ·主要培养基及试剂的配制 | 第25-26页 |
| ·试验方法 | 第26-36页 |
| ·病毒的扩增 | 第26-27页 |
| ·EPC细胞的复苏 | 第26页 |
| ·EPC细胞的传代 | 第26页 |
| ·病毒的增值 | 第26-27页 |
| ·Karber法测定病毒滴度 | 第27页 |
| ·病毒理化特性的测定 | 第27-28页 |
| ·热稳定性试验 | 第27页 |
| ·耐酸碱性试验 | 第27页 |
| ·对有机溶剂敏感性试验 | 第27-28页 |
| ·毒株的鉴定 | 第28-30页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第28页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第28页 |
| ·目的片段的获得与纯化 | 第28-29页 |
| ·目的片段与pMD18-T载体的连接及转化 | 第29页 |
| ·阳性重组质粒的筛选及鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组质粒pMD18-T-IPNV-Sp的抽提 | 第30页 |
| ·序列测定及同源性比对分析 | 第30页 |
| ·病毒回归实验 | 第30-31页 |
| ·应用RT-PCR对人工感染的斑马鱼进行检测 | 第31-32页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第31页 |
| ·反转录 | 第31页 |
| ·PCR扩增反应条件建立 | 第31页 |
| ·RT-PCR的特异性试验 | 第31页 |
| ·RT-PCR的灵敏度试验 | 第31-32页 |
| ·应用PCR-DHPLC对人工感染的斑马鱼进行检测 | 第32页 |
| ·PCR扩增产物的DHPLC分析鉴定 | 第32页 |
| ·PCR-DHPLC的特异性试验 | 第32页 |
| ·PCR-DHPLC的灵敏度试验 | 第32页 |
| ·应用荧光RT-PCR对人工感染的斑马鱼进行检测 | 第32-33页 |
| ·荧光RT-PCR引物及探针的设计 | 第32-33页 |
| ·荧光RT-PCR扩增反应条件的建立 | 第33页 |
| ·荧光RT-PCR的特异性试验 | 第33页 |
| ·荧光RT-PCR的灵敏度试验 | 第33页 |
| ·应用荧光RT-LAMP对人工感染的斑马鱼进行检测 | 第33-36页 |
| ·荧光RT-LAMP引物的设计 | 第33-34页 |
| ·荧光RT-LAMP反应体系及条件的建立 | 第34页 |
| ·荧光RT-LAMP的特异性试验 | 第34-35页 |
| ·荧光RT-LAMP的灵敏度试验 | 第35-36页 |
| 第三章 实验结果 | 第36-53页 |
| ·病毒扩增结果 | 第36-38页 |
| ·毒株鉴定结果 | 第36-37页 |
| ·毒株滴度及理化特性测定 | 第37-38页 |
| ·毒株鉴定结果 | 第38-42页 |
| ·RT-PCR鉴定结果 | 第38-40页 |
| ·目的片段纯化结果 | 第40页 |
| ·目的片段测序结果 | 第40-41页 |
| ·核酸序列及氨基酸序列同源性分析比较 | 第41-42页 |
| ·病毒回归实验 | 第42-45页 |
| ·RT-PCR的特异性试验 | 第43-44页 |
| ·RT-PCR的灵敏度试验 | 第44-45页 |
| ·PCR-DHPLC检测结果 | 第45-47页 |
| ·PCR扩增产物的DHPLC分析结果 | 第45页 |
| ·PCR-DHPLC检测的特异性试验结果 | 第45-46页 |
| ·PCR-DHPLC检测的灵敏度试验结果 | 第46-47页 |
| ·荧光RT-PCR检测结果 | 第47-48页 |
| ·荧光RT-PCR检测的特异性试验结果 | 第47-48页 |
| ·荧光RT-PCR检测的灵敏度试验结果 | 第48页 |
| ·荧光RT-LAMP检测结果 | 第48-53页 |
| ·荧光RT-LAMP扩增结果 | 第48-49页 |
| ·荧光RT-LAMP检测的特异性试验结果 | 第49-51页 |
| ·荧光RT-LAMP检测的灵敏度试验结果 | 第51-53页 |
| 第四章 实验结论 | 第53-54页 |
| 第五章 讨论 | 第54-57页 |
| ·传统诊断方法 | 第54页 |
| ·RT-PCR诊断方法 | 第54页 |
| ·RT-PCR结合变性高效液相色谱技术(DHPLC) | 第54-55页 |
| ·荧光定量RT-PCR | 第55页 |
| ·荧光RT-LAMP | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
