| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-30页 |
| ·蛋白质糖基化研究进展 | 第10-24页 |
| ·蛋白质糖基化概述 | 第10-13页 |
| ·糖基化对蛋白质结构和功能的影响 | 第13-15页 |
| ·蛋白质糖基化研究方法与技术 | 第15-24页 |
| ·蛋白质糖基化工程 | 第24页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶研究进展 | 第24-28页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶概述 | 第24-25页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶的应用 | 第25-26页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶的结构与催化机理 | 第26-27页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶的研究现状 | 第27页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶的糖基化研究进展 | 第27-28页 |
| ·本文的选题依据和研究内容 | 第28-30页 |
| ·选题依据 | 第28-29页 |
| ·研究内容 | 第29-30页 |
| 第二章 β-D-葡萄糖醛酸苷酶的分离纯化过程研究 | 第30-52页 |
| ·引言 | 第30页 |
| ·材料 | 第30-32页 |
| ·菌种 | 第30-31页 |
| ·实验材料 | 第31页 |
| ·主要设备 | 第31页 |
| ·主要溶液 | 第31-32页 |
| ·方法 | 第32-38页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶粗酶液的制备 | 第32-33页 |
| ·超滤浓缩 | 第33页 |
| ·硫酸铵分级沉淀 | 第33-34页 |
| ·Sephadex G-100 凝胶过滤 | 第34页 |
| ·DEAE-cellulose DE-52 阴离子交换层析 | 第34-35页 |
| ·Ni-NTA Sepharose 亲和层析 | 第35页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶活力及蛋白质浓度的测定 | 第35-37页 |
| ·纯度测定 | 第37-38页 |
| ·结果与讨论 | 第38-50页 |
| ·P. purpurogenum Li-3 β-D-葡萄糖醛酸苷酶（PGUS）的分离纯化 | 第38-44页 |
| ·重组毕赤酵母中β-D-葡萄糖醛酸苷酶（PGUS-P）的分离纯化过程 | 第44-47页 |
| ·重组大肠杆菌β-D-葡萄糖醛酸苷酶的(PGUS-E)分离纯化过程 | 第47-50页 |
| ·小结 | 第50-52页 |
| 第三章 三种β-D-葡萄糖醛酸苷酶的性质鉴定和糖基化分析 | 第52-65页 |
| ·引言 | 第52页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·实验材料 | 第52-53页 |
| ·主要仪器 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-56页 |
| ·分子量测定 | 第53页 |
| ·糖基化酶等电点的测定 | 第53-54页 |
| ·肽质量指纹图谱及氨基酸序列测定 | 第54页 |
| ·糖蛋白PAS 染色 | 第54-55页 |
| ·糖蛋白糖苷酶酶切 | 第55页 |
| ·糖含量的测定 | 第55-56页 |
| ·结果与讨论 | 第56-63页 |
| ·三种β-D-葡萄糖醛酸苷酶的分子量 | 第56-58页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶氨基酸序列测定 | 第58-60页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶的定性与定量糖基化分析 | 第60-63页 |
| ·小结 | 第63-65页 |
| 第四章 三种β-D-葡萄糖醛酸苷酶的酶学性质比较 | 第65-76页 |
| ·引言 | 第65页 |
| ·材料 | 第65-66页 |
| ·实验材料 | 第65-66页 |
| ·主要仪器 | 第66页 |
| ·方法 | 第66-67页 |
| ·β-D-葡萄糖醛酸苷酶活力的测定方法 | 第66页 |
| ·pH 对酶活力和酶稳定性的影响 | 第66页 |
| ·温度对酶活力和酶稳定性的影响 | 第66-67页 |
| ·金属离子对酶活力的影响 | 第67页 |
| ·动力学常数的测定 | 第67页 |
| ·结果与讨论 | 第67-74页 |
| ·pH 对酶活性的影响 | 第67-68页 |
| ·温度对酶活性的影响 | 第68-69页 |
| ·三种β-D-葡萄糖醛酸苷酶热稳定性 | 第69页 |
| ·金属离子的影响 | 第69-71页 |
| ·变性剂的影响 | 第71页 |
| ·动力学常数的测定 | 第71-72页 |
| ·三种β-葡萄糖醛酸苷酶对甘草酸的水解反应 | 第72-74页 |
| ·小结 | 第74-76页 |
| 第五章 去糖基化处理对β-D-葡萄糖醛酸苷酶酶学特性影响 | 第76-88页 |
| ·引言 | 第76页 |
| ·材料 | 第76-77页 |
| ·实验材料 | 第76-77页 |
| ·主要仪器 | 第77页 |
| ·方法 | 第77页 |
| ·结果与讨论 | 第77-87页 |
| ·PGUS-P 去糖基化条件优化 | 第77-80页 |
| ·去N-糖基化对PGUS-P 酶活力的影响 | 第80页 |
| ·最适反应pH 值和pH 稳定性 | 第80-82页 |
| ·最适反应温度和温度稳定性 | 第82-83页 |
| ·金属离子的影响 | 第83-85页 |
| ·动力学常数的测定 | 第85-86页 |
| ·催化甘草酸的水解反应 | 第86-87页 |
| ·小结 | 第87-88页 |
| 第六章 N-糖基化对β-D-葡萄糖醛酸苷酶稳定性和构象影响 | 第88-99页 |
| ·引言 | 第88页 |
| ·材料 | 第88-89页 |
| ·实验材料 | 第88-89页 |
| ·主要仪器 | 第89页 |
| ·方法 | 第89-90页 |
| ·去糖基化酶的制备 | 第89页 |
| ·酶活的测定 | 第89页 |
| ·构象稳定性实验 | 第89页 |
| ·差示扫描量热分析 | 第89-90页 |
| ·荧光光谱分析 | 第90页 |
| ·圆二色谱分析 | 第90页 |
| ·结果与讨论 | 第90-98页 |
| ·N-糖基化对PGUS-P 酶稳定性的影响 | 第90-94页 |
| ·热学特性分析 | 第94-95页 |
| ·荧光光谱三级结构分析 | 第95-96页 |
| ·圆二色谱二级构象分析 | 第96-97页 |
| ·构象稳定机理 | 第97-98页 |
| ·小结 | 第98-99页 |
| 第七章 结论与展望 | 第99-103页 |
| ·结论 | 第99-101页 |
| ·创新点 | 第101页 |
| ·对今后工作的建议与展望 | 第101-103页 |
| 参考文献 | 第103-114页 |
| 发表论文和科研情况说明 | 第114-116页 |
| 附录A 质谱法测定氨基酸序列 | 第116-119页 |
| 附录B β-D-葡萄糖醛酸苷酶的氨基酸序列和潜在N-糖基化位点 | 第119-120页 |
| 致谢 | 第120页 |
