| 前言 | 第1-13页 |
| 中文摘要 | 第13-15页 |
| 文献综述 | 第15-57页 |
| 第一章 猪瘟及猪瘟病毒的研究进展 | 第15-29页 |
| 1． 猪瘟研究进展 | 第15-19页 |
| 1．1 猪瘟概述 | 第15页 |
| 1．2 猪瘟的病原 | 第15页 |
| 1．3 猪瘟的发病机理和临床症状 | 第15-16页 |
| 1．4 猪瘟的流行分布 | 第16页 |
| 1．5 猪瘟的诊断和免疫 | 第16-17页 |
| 1．6 猪瘟的防制 | 第17-18页 |
| 1．7 猪瘟疫苗 | 第18-19页 |
| 2． 猪瘟病毒研究进展 | 第19-29页 |
| 2．1 猪瘟病毒的形态及理化特性 | 第19-20页 |
| 2．2 猪瘟病毒的基因组结构 | 第20-21页 |
| 2．3 猪瘟病毒的侵入及复制 | 第21-22页 |
| 2．4 猪瘟病毒编码蛋白及其功能 | 第22-25页 |
| 2．5 猪瘟病毒的抗原性 | 第25-26页 |
| 2．6 猪瘟病毒的生物型 | 第26页 |
| 2．7 猪瘟病毒的分子病理学 | 第26-27页 |
| 2．8 猪瘟病毒的遗传分型及分布 | 第27-29页 |
| 第二章 基因与基因表达的研究进展 | 第29-47页 |
| 1． 基因的研究 | 第29-30页 |
| 1．1 基因学说的创立 | 第29页 |
| 1．2 基因表达与调控 | 第29-30页 |
| 1．3 基因的合成 | 第30页 |
| 2． 基因工程 | 第30-31页 |
| 2．1 基因工程的诞生 | 第30页 |
| 2．2 重组DNA技术的应用与发展 | 第30页 |
| 2．3 基因工程的目的 | 第30-31页 |
| 3． 基因表达系统 | 第31-47页 |
| 3．1 原核表达系统 | 第31-34页 |
| 3．2 真核表达系统 | 第34-47页 |
| 第三章 基因工程疫苗研究进展 | 第47-57页 |
| 1． 基因工程亚单位疫苗 | 第47-49页 |
| 1．1 抗原编码基因的获得 | 第48页 |
| 1．2 表达系统选择 | 第48页 |
| 1．3 重组亚单位疫苗研究所取得的进展 | 第48-49页 |
| 2． 基因工程活载体疫苗 | 第49-51页 |
| 2．1 基因突变疫苗及基因缺失疫苗 | 第49-50页 |
| 2．2 复制性活载体重组病毒疫苗 | 第50页 |
| 2．3 非复制性活载体疫苗 | 第50页 |
| 2．4 载体的选择 | 第50-51页 |
| 3． 核酸疫苗 | 第51-53页 |
| 3．1 核酸疫苗表达载体的构建 | 第51-52页 |
| 3．2 核酸疫苗的导入 | 第52页 |
| 3．3 核酸疫苗作用机制 | 第52-53页 |
| 4． 肽疫苗 | 第53页 |
| 5． 猪瘟基因工程疫苗研究意义及进展 | 第53-57页 |
| 5．1 研究意义 | 第53-54页 |
| 5．2 研究进展 | 第54-57页 |
| 试验研究 | 第57-108页 |
| 第四章 中国猪瘟兔化弱毒株（C-株）兔脾组织毒保护性抗原E2基因克隆与序列分析 | 第57-65页 |
| 1． 材料和方法 | 第57-61页 |
| 1．1 病毒株 | 第57-58页 |
| 1．2 所用试剂仪器 | 第58页 |
| 1．3 引物的设计和合成 | 第58页 |
| 1．4 RT-PCR及nPCR | 第58-59页 |
| 1．5 扩增片段的酶切鉴定 | 第59页 |
| 1．6 猪瘟病毒特异性扩增片段的回收与纯化 | 第59页 |
| 1．7 猪瘟病毒特异性扩增片段的克隆 | 第59-60页 |
| 1．8 重组质粒的核酸序列测定 | 第60-61页 |
| 2． 结果 | 第61-63页 |
| 2．1 总RNA提取及鉴定 | 第61页 |
| 2．2 RT-PCR及nPCR | 第61页 |
| 2．3 扩增片段的酶切鉴定 | 第61页 |
| 2．4 核苷酸序列测定 | 第61-62页 |
| 2．5 核苷酸序列与氨基酸序列分析 | 第62页 |
| 2．6 疏水性及抗原性预测的比较 | 第62页 |
| 2．7 中和性抗原区的氨基酸比较 | 第62-63页 |
| 3． 讨论 | 第63-64页 |
| 4． 小结 | 第64-65页 |
| 第五章 猪瘟病毒E2基因遗传变异分析 | 第65-71页 |
| 1． 材料和方法 | 第65-66页 |
| 1．1 C-株疫苗毒 | 第65-66页 |
| 1．2 猪瘟流行毒株病料 | 第66页 |
| 1．3 引物的设计与合成 | 第66页 |
| 1．4 RT-PCR和测序 | 第66页 |
| 1．5 分子遗传分析 | 第66页 |
| 2． 结果 | 第66-68页 |
| 2．1 E2基因的核酸序列分析 | 第66-67页 |
| 2．2 猪瘟病毒C-株兔脾组织毒E2基因与各毒株的同源性关系分析 | 第67页 |
| 2．3 毒株的遗传发生关系分析 | 第67-68页 |
| 3． 讨论 | 第68-69页 |
| 4． 小结 | 第69-71页 |
| 第六章 猪瘟病毒E2基因在真核表达系统酵母中的表达 | 第71-83页 |
| 1． 材料和方法 | 第71-77页 |
| 1．1 毒株、菌株与表达系统 | 第71页 |
| 1．2 酶与试剂 | 第71页 |
| 1．3 各种酵母培养基配制 | 第71-72页 |
| 1．4 引物的设计与合成 | 第72页 |
| 1．5 Shimen毒E2基因的克隆和鉴定 | 第72页 |
| 1．6 天然E2基因的改造 | 第72-73页 |
| 1．7 重组转移载体质粒的构建 | 第73页 |
| 1．8 酵母感受态细胞的制备及外源基因的转化与整合 | 第73页 |
| 1．9 酵母转化子的鉴定筛选 | 第73-76页 |
| 1．10 重组酵母菌株的诱导表达 | 第76页 |
| 1．11 表达产物的初步纯化 | 第76页 |
| 1．12 表达产物的检测与定量 | 第76-77页 |
| 1．13 表达产物免疫学检测 | 第77页 |
| 2． 结果 | 第77-81页 |
| 2．1 E2基因克隆鉴定 | 第77页 |
| 2．2 E2基因的改造 | 第77页 |
| 2．3 重组酵母表达载体的构建 | 第77-78页 |
| 2．4 酵母重组转化子的筛选 | 第78页 |
| 2．5 重组酵母DNA斑点试验 | 第78-79页 |
| 2．6 重组酵母DNA中E2基因PCR扩增与测序 | 第79-80页 |
| 2．7 表达产物SDS-PAGE和Western blot | 第80-81页 |
| 2．8 表达产物的免疫原性鉴定 | 第81页 |
| 3． 讨论 | 第81-82页 |
| 4． 小结 | 第82-83页 |
| 第七章 猪瘟病毒流行毒株E2基因密码子优化及在酵母中的表达 | 第83-91页 |
| 1． 材料和方法 | 第83-87页 |
| 1．1 毒株、菌株和DNA载体 | 第83页 |
| 1．2 酶与试剂 | 第83页 |
| 1．3 RT-PCR及nPCR | 第83-84页 |
| 1．4 E2基因密码子的优化 | 第84-86页 |
| 1．5 重组酵母表达载体的构建 | 第86页 |
| 1．6 酵母的转化及重组酵母的筛选 | 第86-87页 |
| 1．7 重组酵母的培养及诱导表达 | 第87页 |
| 1．8 表达E2蛋白的SDS-PAGE分析和Western blot鉴定 | 第87页 |
| 2． 结果 | 第87-89页 |
| 2．1 E2基因密码子的优化 | 第87页 |
| 2．2 重组酵母表达载体的构建 | 第87-88页 |
| 2．3 E2基因表达产物的SDS-PAGE分析和Western blot鉴定 | 第88-89页 |
| 3． 讨论 | 第89-90页 |
| 4． 小结 | 第90-91页 |
| 第八章 猪瘟病毒E2蛋白分泌表达条件的优化 | 第91-95页 |
| 1． 材料和方法 | 第91-92页 |
| 1．1 毒株、菌株与表达系统 | 第91页 |
| 1．2 酶与试剂 | 第91页 |
| 1．3 基因克隆 | 第91页 |
| 1．4 酵母细胞的转化及阳性转化子筛选 | 第91页 |
| 1．5 不同时间的表达 | 第91页 |
| 1．6 不同诱导型表达 | 第91页 |
| 1．7 在不同pH的培养液中表达 | 第91-92页 |
| 1．8 不同剂量甲醇诱导表达 | 第92页 |
| 2． 结果 | 第92-93页 |
| 2．1 高拷贝克隆的挑选 | 第92页 |
| 2．2 不同时间的表达 | 第92页 |
| 2．3 不同诱导型的表达 | 第92-93页 |
| 2．4 不同pH的培养液中表达 | 第93页 |
| 2．5 不同剂量甲醇诱导的表达 | 第93页 |
| 3． 讨论 | 第93-94页 |
| 4． 小结 | 第94-95页 |
| 第九章 猪瘟病毒E2基因主要抗原区在原核表达系统大肠杆菌中的表达 | 第95-101页 |
| 1． 材料和方法 | 第95-96页 |
| 1．1 病毒株 | 第95页 |
| 1．2 菌株与质粒 | 第95页 |
| 1．3 工具酶及试剂 | 第95页 |
| 1．4 引物设计与合成 | 第95页 |
| 1．5 广西玉林株与C-株E2基因主要抗原区的获取 | 第95-96页 |
| 1．6 重组表达载体的构建与鉴定 | 第96页 |
| 1．7 E2基因主要抗原区在大肠杆菌中的表达 | 第96页 |
| 1．8 表达蛋白的检测 | 第96页 |
| 2． 结果 | 第96-100页 |
| 2．1 PCR扩增产物 | 第96-97页 |
| 2．2 pGEM E2-GXYL与pGEM E2-C的PCR及酶切鉴定 | 第97页 |
| 2．3 pPROEXE2-GXYL与pPROEXE2-C的PCR及酶切鉴定 | 第97-98页 |
| 2．4 重组表达质粒pPROEXE2-pPROEXE2-C的构建 | 第98-99页 |
| 2．5 SDS-PAGE和Western blot | 第99-100页 |
| 3． 讨论 | 第100页 |
| 4． 小结 | 第100-101页 |
| 第十章 猪瘟病毒E2基因在山羊乳腺上皮细胞表达载体的构建 | 第101-108页 |
| 1． 材料和方法 | 第101-103页 |
| 1．1 细胞、菌株和载体 | 第101页 |
| 1．2 酶、试剂和基因 | 第101-102页 |
| 1．3 原代山羊乳腺上皮细胞的培养 | 第102页 |
| 1．4 引物的设计与合成 | 第102页 |
| 1．5 目的基因的准备 | 第102页 |
| 1．6 表达载体的构建 | 第102-103页 |
| 2． 结果 | 第103-106页 |
| 2．1 PCR扩增信号肽序列 | 第103页 |
| 2．2 S-E2连接产物PCR扩增 | 第103-104页 |
| 2．3 酶切后平端化的P22和Kana片段 | 第104页 |
| 2．4 P22载体与Kana DNA片段的连接 | 第104页 |
| 2．5 P22-S-E2重组载体构建策略 | 第104-106页 |
| 3． 讨论 | 第106-107页 |
| 4． 小结 | 第107-108页 |
| 研究结论 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-139页 |
| 英文摘要 | 第139-141页 |
| 个人简历 | 第141页 |
