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血管内皮细胞和中性粒细胞迁移的细胞骨架调控机制

摘要第1-7页
Abstract第7-12页
第一章 引言第12-49页
 第一节 细胞迁移中的细胞骨架第12-24页
     ·细胞迁移第12-13页
     ·细胞迁移中的微丝第13-18页
     ·微管在细胞迁移的作用第18-24页
 第二节 中性粒细胞第24-34页
     ·中性粒细胞的产生和释放第24-26页
     ·中性粒细胞募集到炎症部位的过程及调控第26-32页
     ·中性粒细胞杀菌机制第32-34页
 第三节 Hsp70/Hsp90 Organizing Protein(HOP)简述第34-40页
     ·HOP的发现和遗传学信息第34-36页
     ·HOP调节Hsp90和Hsp70活性第36-37页
     ·HOP的TPR及其他功能性结构域第37-39页
     ·HOP的其他生物学功能第39-40页
 第四节 S-谷光甘肽化简述第40-49页
     ·S-谷光甘肽化第40-44页
     ·Grx(glutaredoxin)第44-47页
     ·S-谷光甘肽化调节的细胞活动第47-49页
第二章 HOP调节血管内皮细胞迁移第49-73页
 第一节 材料、试剂与方法第49-60页
     ·本章所用细胞系第49-50页
     ·本章所用的抗体第50页
     ·本章所用主要药品试剂第50-51页
     ·本章用仪器设备第51页
     ·本章所用质粒及构建第51-53页
     ·shRNA的构建第53-54页
     ·质粒转染第54-55页
     ·siRNA的转染第55页
     ·免疫杂交(Western blotting)第55-56页
     ·融合蛋白GST-HOP的诱导表达第56页
     ·免疫共沉淀第56-57页
     ·GST-pulldown第57页
     ·免疫荧光染色实验第57页
     ·SRB检测细胞增殖第57-58页
     ·AnnexinⅤ检测细胞凋亡第58页
     ·细胞划痕愈合实验第58页
     ·Transwell细胞迁移实验第58-59页
     ·血管内皮细胞体外成管实验第59页
     ·三维毛细血管出芽形成实验第59-60页
     ·细胞极化实验第60页
     ·活细胞膜皱褶实验第60页
 第二节 本章实验结果第60-73页
     ·HOP促进体外血管内皮细胞成管和毛细血管出芽第60-62页
     ·敲减HOP不影响血管内皮细胞增殖或凋亡速率第62-64页
     ·HOP对血管内皮细胞迁移很重要第64-66页
     ·HOP调节迁移细胞极性和膜皱褶动态性第66-68页
     ·HOP与微管共定位,并与微管蛋白相互作用第68-70页
     ·胞外HOP不影响血管内皮细胞迁移或体外成管第70-73页
第三章 谷胱甘肽化调控中性粒细胞的actin动态性第73-97页
 第一节 材料与方法第74-79页
     ·实验动物第74页
     ·培养和分化HL60细胞第74页
     ·中性粒细胞分离第74-75页
     ·细胞裂解和谷光甘肽化的免疫杂交第75页
     ·EZ-taxiscan趋化实验第75-76页
     ·分析细胞运动轨迹和形态第76-77页
     ·HL60细胞系中野生型和突变型actin的表达第77页
     ·细胞皱褶(极化)实验第77-78页
     ·体外吞噬作用实验第78页
     ·腹膜炎模型体内噬菌作用第78页
     ·¨中性粒细胞继承性移植第78-79页
     ·Luminol化学发光法来测量ROS第79页
     ·Wright-Giemsa染色第79页
 第二节 本章实验结果第79-97页
     ·ROS提升被刺激的中性粒细胞actin谷光甘肽化水平第79-80页
     ·ROS和谷光甘肽化蛋白在趋化中的中性粒细胞的定位第80-81页
     ·ROS的清除导致F-actin总量明显增高第81-82页
     ·过表达Grx1对actin动态性和趋化的影响第82-83页
     ·干扰Grx1修复清除ROS引起的中性粒细胞趋化缺陷第83-86页
     ·Grx1是actin动态性的关键生理调节因子第86-92页
     ·Grx1的敲除削弱腹膜炎鼠的中性粒细胞募集和杀菌能力第92-97页
第四章 结论与展望第97-101页
 第一节 HOP在细胞迁移中的作用第97-98页
 第二节 谷光甘肽化修饰对actin动态性的调控第98-101页
参考文献第101-112页
致谢第112-114页
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果第114页
 个人简历第114页
 在学期间发表的学术论文第114页

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