| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 本文縮略词 | 第12-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-37页 |
| 1 非生物胁迫下植物的应对机理 | 第13-19页 |
| ·植物胁迫信号的感应及转导 | 第13-14页 |
| ·ABA与植物抗胁迫 | 第14-16页 |
| ·ABA受体 | 第14-15页 |
| ·ABA的代谢与植物逆境胁迫的关系 | 第15页 |
| ·依赖ABA的信号转导及基因表达 | 第15-16页 |
| ·Ca~(2+)及其相关蛋白 | 第16-18页 |
| ·CBL-CIPK途径调节Na~+转运及耐盐过程 | 第17-18页 |
| ·CBL-CIPK途径与K+的流入 | 第18页 |
| ·磷脂信号转导在逆境条件下的作用 | 第18-19页 |
| ·活性氧(ROS) | 第19页 |
| 2 逆境胁迫下的植物基因表达调控 | 第19-23页 |
| ·转录因子在植物逆境下的调控作用 | 第19-20页 |
| ·逆境下非依赖于ABA的基因表达调控 | 第20-22页 |
| ·DREB1与DREB2 | 第20-22页 |
| ·其它类型非依赖ABA基因表达调控 | 第22页 |
| ·逆境下依赖于ABA的基因表达调控 | 第22-23页 |
| 3 植物逆境下表观遗传组的变化 | 第23-26页 |
| ·基因组DNA的甲基化 | 第24页 |
| ·组蛋白的修饰 | 第24-25页 |
| ·smRNA | 第25页 |
| ·RNA可变性剪接机制 | 第25-26页 |
| 4 逆境下植物差异表达基因的分离方法 | 第26-30页 |
| ·差异表达PCR(DD-PCR) | 第26页 |
| ·cDNA-AFLP法 | 第26-27页 |
| ·缩减杂交 | 第27-28页 |
| ·微阵列 | 第28页 |
| ·SAGE | 第28-29页 |
| ·电子克隆 | 第29-30页 |
| ·图位克隆 | 第30页 |
| 5 植物耐盐基因的克隆及应用 | 第30-32页 |
| ·与盐胁迫下的信号转导途径相关的基因 | 第31页 |
| ·与离子转运及离子平衡相关的基因 | 第31页 |
| ·参与渗透保护物质的生物合成类基因 | 第31-32页 |
| ·其它耐盐胁迫的相关基因 | 第32页 |
| 6 棉花的耐盐机制 | 第32-35页 |
| ·棉花耐盐水平 | 第32-33页 |
| ·棉花耐盐机制 | 第33页 |
| ·棉花耐盐种质资源 | 第33-34页 |
| ·棉花耐盐基因的研究现状 | 第34-35页 |
| 7 本研究的主要内容、意义及技术思路 | 第35-37页 |
| ·研究意义与内容 | 第35页 |
| ·技术路线 | 第35-37页 |
| 第二部分 研究报告 | 第37-85页 |
| 第一章 利用cDNA-AFLP技术分离盐胁迫下棉花野生种叶片中特异基因片段 | 第37-55页 |
| 引言 | 第37页 |
| 1 实验材料 | 第37-38页 |
| ·植物材料 | 第37-38页 |
| ·菌种 | 第38页 |
| 2 仪器设备和试剂 | 第38-39页 |
| ·仪器与设备 | 第38页 |
| ·试剂 | 第38-39页 |
| 3 实验方法 | 第39-47页 |
| ·植物材料处理方法 | 第39-40页 |
| ·双链cDNA的合成 | 第40-41页 |
| ·RNA提取 | 第40页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第40-41页 |
| ·cDNA第二链的合成 | 第41页 |
| ·cDNA-AFLP的方法步骤 | 第41-43页 |
| ·酶切体系(20μl体系) | 第41页 |
| ·连接体系(15μl体系) | 第41-42页 |
| ·预扩增 | 第42页 |
| ·选择性扩增 | 第42-43页 |
| ·凝胶分析 | 第43-44页 |
| ·制胶 | 第43页 |
| ·电泳 | 第43页 |
| ·银染方法 | 第43-44页 |
| ·特异片段的回收测序 | 第44-46页 |
| ·特异片段的回收 | 第44页 |
| ·将特异片段连入T载体并测序 | 第44-45页 |
| ·特异片段的电子延伸 | 第45-46页 |
| ·RT-PCR验证相关基因片段的表达状况 | 第46-47页 |
| 4 实验结果与分析 | 第47-54页 |
| ·盐胁迫下差异表达片段的筛选与分离 | 第47-48页 |
| ·特异EST片段电子延伸结果 | 第48-51页 |
| ·部分片段的RT-PCR检测及分析 | 第51-54页 |
| 5 讨论 | 第54-55页 |
| 第二章 棉属野生种早地棉耐盐相关基因GarMSL,GarCYP,GarTHA全长基因的克隆 | 第55-73页 |
| 引言 | 第55页 |
| 1 实验材料、仪器与试剂(同第一章) | 第55页 |
| 2 实验方法 | 第55-57页 |
| ·旱地棉幼苗的培养与处理(同第一章) | 第55页 |
| ·染色体步行(GenomeWalking)的方法 | 第55-57页 |
| ·旱地棉总基因组DNA的提取 | 第55-57页 |
| ·GenomeWalking方法步骤 | 第57页 |
| 3 结果与分析 | 第57-71页 |
| ·类机械敏感离子通道基因(mechanosensitive channel of small conductance like,MscS-like)的克隆 | 第57-64页 |
| ·GarMSL基因序列的分析 | 第59-60页 |
| ·GarMSL蛋白序列的分析 | 第60-64页 |
| ·GarCYP基因的克隆与生物信息学分析 | 第64-67页 |
| ·GarCYP基因序列分析 | 第64-66页 |
| ·GarCYP基因启动子区域分析 | 第66-67页 |
| ·旱地棉苏氨酸醛缩酶(THA)基因的初步分析 | 第67-71页 |
| ·GarTHA基因序列的分析 | 第67-68页 |
| ·GarTHA基因蛋白序列的分析 | 第68-70页 |
| ·GarTHA基因可能的功能预测 | 第70-71页 |
| 4 结论及讨论 | 第71-73页 |
| 第三章 GarMSL,GarCYP,GarTHA基因功能的初步鉴定 | 第73-85页 |
| 引言 | 第73页 |
| 1 试验材料 | 第73-74页 |
| ·植物材料 | 第73页 |
| ·菌种和质粒 | 第73-74页 |
| 2 仪器设备与试剂 | 第74页 |
| 3 实验方法 | 第74-78页 |
| ·35S植物表达载体 | 第74-76页 |
| ·设计引物 | 第74-75页 |
| ·载体的构建 | 第75-76页 |
| ·拟南芥逆境特异启动子RD29A表达载体的构建 | 第76页 |
| ·根癌农杆菌介导烟草转基因 | 第76-78页 |
| ·准备工程菌 | 第76-77页 |
| ·烟草转化 | 第77页 |
| ·转基因烟草的分子检测 | 第77-78页 |
| ·转基因烟草耐盐性的初步鉴定 | 第78页 |
| 4 实验结果 | 第78-81页 |
| ·相关载体酶切检测 | 第78-79页 |
| ·转基因烟草的分子检测 | 第79-80页 |
| ·转基因植株的形态观察及耐盐性的初步分析 | 第80-81页 |
| 5 讨论 | 第81-85页 |
| 全文结论与创新点 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-101页 |
| 附录 | 第101-103页 |
| 攻读硕士研究生期间发表的学术论文 | 第103-105页 |
| 致谢 | 第105页 |
