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水淹胁迫下拟南芥NADPH氧化酶AtrbohD的功能研究

缩写词第1-6页
摘要第6-8页
ABSTRACT第8-13页
1 前言第13-25页
   ·缺氧胁迫对植物的伤害第13-15页
     ·能量耗竭第13页
     ·胞质酸化第13-14页
     ·活性氧伤害第14页
     ·糖酵解和发酵代谢末端产物的积累第14-15页
     ·还原性物质的毒害第15页
     ·能源物质的匮乏第15页
   ·植物对缺氧胁迫适应第15-17页
     ·形态适应第15-16页
     ·代谢适应第16-17页
   ·植物缺氧信号转导机制研究进展第17-18页
   ·ROS 在植物应答非生物胁迫中的作用第18-22页
     ·ROS 来源第18-19页
     ·ROS 信号调节植物缺氧胁迫反应的机制第19-20页
     ·质膜NADPH 氧化酶的研究进展第20-22页
   ·立题依据第22-25页
2 材料和方法第25-41页
   ·实验材料第25页
     ·植物材料和菌株第25页
     ·质粒载体第25页
   ·实验试剂第25-26页
   ·实验溶液第26-28页
     ·常用溶液及培养基第26-27页
     ·H_20_2 含量测定第27页
     ·ADH 活性测定第27页
     ·GUS 染色第27页
     ·GUS 活性测定第27-28页
   ·实验所用引物第28-30页
     ·拟南芥纯合突变体鉴定所用引物第28页
     ·RT-PCR 鉴定基因表达所用引物第28-29页
     ·构建载体所用引物第29页
     ·荧光定量PCR 所用引物第29-30页
   ·实验方法第30-41页
     ·拟南芥种植第30页
     ·纯合突变体的PCR 鉴定第30页
     ·拟南芥基因组DNA 小量提取方法第30-31页
     ·拟南芥总RNA 提取(Trizol 法)第31页
     ·反转录制备拟南芥cDNA第31-32页
     ·RT-PCR 检测基因表达第32页
     ·DNA 琼脂糖凝胶电泳第32-33页
     ·荧光定量PCR 检测基因表达第33页
     ·重组质粒载体构建第33-34页
     ·PCR 产物回收和纯化第34-35页
     ·大肠杆菌电击转化感受态细胞制备及转化第35页
     ·质粒DNA 提取第35-36页
     ·重组质粒鉴定第36页
     ·农杆菌介导的转化及拟南芥转基因植物筛选第36-37页
     ·ADH 活性测定第37-38页
     ·过氧化氢含量测定第38页
     ·β-葡萄糖苷酸酶(GUS)的组织化学鉴定第38-39页
     ·β-葡萄糖苷酸酶(GUS)活性测定第39页
     ·统计学分析第39-41页
3 结果与分析第41-57页
   ·突变体鉴定第41-42页
     ·DNA 插入突变体进行鉴定第41页
     ·RT-PCR 鉴定第41-42页
   ·相关载体的构建第42-46页
     ·AtrbohD 超表达载体的构建及超表达植株的鉴定第42-44页
     ·AtrbohD::GUS 载体的构建第44页
     ·ADH::GUS 载体的构建第44-45页
     ·ROP2::GUS 载体构建第45-46页
   ·突变体表型分析第46-47页
   ·水淹胁迫下WT 植株中D 基因表达第47-48页
     ·RT-PCR 及荧光定量PCR 结果第47页
     ·AtrbohD::GUS 转WT 植株在水淹下染色GUS 活性变化第47-48页
   ·水淹胁迫对植株ADH 活性的影响第48-51页
     ·WT 与不同突变体ADH 特异活性变化第48-49页
     ·WT 与不同突变体ADH 基因表达变化第49-50页
     ·ADH::GUS 染色及活性在水淹下的变化第50-51页
   ·水淹胁迫对不同植株中ROP2 的影响第51-54页
     ·水淹下WT 与突变体内ROP2 基因表达的变化第51-52页
     ·GUS 染色及活性在水淹处理下的变化第52-54页
   ·水淹胁迫下WT 与不同突变体H202 含量第54-55页
   ·ATRBOHD::GFP 和ROPGAP4::GUS 载体构建第55-57页
4 讨论第57-59页
5 结论第59-61页
参考文献第61-69页
致谢第69-70页

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