| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 1 绪论 | 第12-18页 |
| ·研究意义与背景 | 第12-13页 |
| ·国内外研究现况 | 第13-15页 |
| ·人胰岛素及类似物的研究现况 | 第13-14页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第14-15页 |
| ·研究目的 | 第15-16页 |
| ·研究内容与技术路线 | 第16-18页 |
| 2 重组质粒构建与鉴定 | 第18-28页 |
| ·引言 | 第18-19页 |
| ·材料与仪器 | 第19-21页 |
| ·主要材料 | 第19-20页 |
| ·主要材料 | 第20-21页 |
| ·两种重组质粒的构建与鉴定 | 第21-25页 |
| ·构建重组质粒 pGAPZαA- HMPIDesB~(30) | 第21-23页 |
| ·重组质粒 pGAPZαA- HMPIDesB~(30)的鉴定 | 第23-24页 |
| ·构建重组质粒 pPIC9K- HMPIDesB~(30) | 第24-25页 |
| ·重组质粒 pPIC9K- HMPIDesB~(30)的鉴定 | 第25页 |
| ·结果与分析 | 第25-28页 |
| ·pGAPZαA- HMPIDesB~(30)的鉴定结果 | 第25-26页 |
| ·pPIC9K- HMPIDesB~(30) 的鉴定结果 | 第26-27页 |
| ·目的基因测序结果 | 第27-28页 |
| 3 不同启动子重组菌株的转化和筛选 | 第28-40页 |
| ·引言 | 第28-29页 |
| ·材料与仪器 | 第29-32页 |
| ·主要材料 | 第29-32页 |
| ·主要仪器 | 第32页 |
| ·重组菌株的转化与筛选 | 第32-36页 |
| ·pPIC9K- HMPIDesB~(30)/ GS115 菌株的转化与筛选 | 第32-34页 |
| ·pGAPZαA- HMPIDesB~(30)/ GS115 菌株的转化与筛选 | 第34-35页 |
| ·pPIC9K-pGAPZαA- HMPIDesB~(30)/ GS115 菌株的转化与筛选 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-39页 |
| ·pPIC9K- HMPIDesB~(30)/ GS115 菌株的筛选结果 | 第36-37页 |
| ·pGAPZαA- HMPIDesB~(30)/GS115 菌株的筛选结果 | 第37-38页 |
| ·pPIC9K-pGAPZαA- HMPIDesB~(30)/ GS115 菌株的筛选结果 | 第38-39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 4 三株重组菌株的发酵研究 | 第40-50页 |
| ·引言 | 第40-41页 |
| ·材料与方法 | 第41-44页 |
| ·主要材料 | 第41-42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·参数检测与分析方法 | 第42-44页 |
| ·摇瓶培养的研究与结果 | 第44-46页 |
| ·不同温度对毕赤酵母生长的影响 | 第44页 |
| ·不同 pH 对毕赤酵母生长的影响 | 第44-45页 |
| ·甲醇诱导浓度对 FJ-H_1菌株表达胰岛素前体的影响 | 第45-46页 |
| ·发酵工艺的研究与结果 | 第46-48页 |
| ·FJ-H_2菌株的发酵研究 | 第46-47页 |
| ·FJ-H1、FJ-H_3菌株的发酵研究 | 第47-48页 |
| ·小结 | 第48-50页 |
| 5 FJ-H_3菌株表达胰岛素前体的纯化及酶切鉴定 | 第50-60页 |
| ·引言 | 第50-51页 |
| ·材料与方法 | 第51-54页 |
| ·材料 | 第51-52页 |
| ·方法 | 第52-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-60页 |
| ·胰岛素原的纯化结果 | 第54-56页 |
| ·胰岛素原的酶切与鉴定结果 | 第56-58页 |
| ·初步药效结果 | 第58-60页 |
| 6 结论与展望 | 第60-62页 |
| ·结论 | 第60页 |
| ·本研究的创新性 | 第60-61页 |
| ·展望 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 附录 | 第68-70页 |
| 附图 | 第70-71页 |
