| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-17页 |
| ·溶菌酶概述 | 第7页 |
| ·溶菌酶的分类 | 第7页 |
| ·溶菌酶的分子结构 | 第7-8页 |
| ·溶菌酶的生物学性质 | 第8-9页 |
| ·溶菌酶的应用 | 第9-11页 |
| ·溶菌酶在医药领域中的应用 | 第9-10页 |
| ·溶菌酶在食品领域中的应用 | 第10-11页 |
| ·溶菌酶在其它领域中的应用 | 第11页 |
| ·重组溶菌酶国内外研究进展 | 第11-12页 |
| ·溶菌酶在植物中表达的研究 | 第11页 |
| ·溶菌酶在动物体内表达的研究 | 第11-12页 |
| ·溶菌酶在微生物中表达的研究 | 第12页 |
| ·碱性成纤维细胞生长因子概述 | 第12-13页 |
| ·基因工程药物研究概述 | 第13-14页 |
| ·课题背景及研究内容 | 第14-17页 |
| 第二章 人溶菌酶基因的合成与表达 | 第17-35页 |
| ·材料 | 第17页 |
| ·菌株及质粒 | 第17页 |
| ·原料及试剂 | 第17页 |
| ·培养基和试剂的配制 | 第17-19页 |
| ·培养基的配制 | 第17-18页 |
| ·常用储存液的配制 | 第18页 |
| ·碱裂解法质粒提取主要试剂的配制 | 第18-19页 |
| ·SDS-PAGE 电泳所用试剂的配制 | 第19页 |
| ·实验方法 | 第19-30页 |
| ·人溶菌酶基因的合成 | 第19-21页 |
| ·重组质粒pUCm-T-hly的构建 | 第21-23页 |
| ·重组质粒pPIC9K-hly的构建 | 第23-25页 |
| ·毕赤酵母GS115的转化 | 第25-26页 |
| ·高拷贝重组子GS/hly的筛选及鉴定 | 第26-27页 |
| ·毕赤酵母GS/hly的诱导表达 | 第27页 |
| ·发酵液上清SDS-PAGE电泳分析 | 第27-28页 |
| ·发酵液上清的抗菌活性检测 | 第28-29页 |
| ·摇瓶发酵条件的初步优化 | 第29-30页 |
| ·结果与讨论 | 第30-35页 |
| ·人溶菌酶基因的合成 | 第30页 |
| ·重组质粒pUCm-T-hly的构建及鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组质粒pPIC9K-hly的构建及鉴定 | 第31页 |
| ·重组毕赤酵母GS/hly的鉴定 | 第31-32页 |
| ·发酵液上清SDS-PAGE电泳分析 | 第32-33页 |
| ·目的蛋白的活性检测 | 第33页 |
| ·摇瓶发酵条件的初步优化 | 第33-35页 |
| 第三章 hLY-hbFGF融合基因的构建与表达 | 第35-43页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·菌株及质粒 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·培养基和试剂的配制 | 第35页 |
| ·培养基的配制 | 第35页 |
| ·试剂的配制 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-38页 |
| ·融合基因片段 hly-thr-hbfgf 的合成 | 第35-37页 |
| ·重组质粒pUCm-T-hly-thrsite-hbfgf的构建 | 第37-38页 |
| ·重组质粒pPIC9K-hly-thrsite-hbfgf的构建 | 第38页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第38页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE电泳检测 | 第38页 |
| ·表达产物的初步活性检测 | 第38页 |
| ·结果与讨论 | 第38-43页 |
| ·重组质粒pUCm-T-hly-thrsite-hbfgf的构建及鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组质粒pPIC9K-hly-thrsite-hbfgf的构建及鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组毕赤酵母的鉴定 | 第40页 |
| ·融合蛋白的鉴定 | 第40-43页 |
| 第四章 融合蛋白hLY-hbFGF的分离纯化 | 第43-47页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·材料与试剂 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| ·试剂配制 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-44页 |
| ·融合蛋白hLY-hbFGF的硫酸铵盐析 | 第44页 |
| ·Sephadex G-75凝胶柱的制备 | 第44页 |
| ·加样和洗脱 | 第44页 |
| ·融合蛋白表达量Bradford法及凝血酶切割分析 | 第44页 |
| ·结果与讨论 | 第44-47页 |
| ·融合蛋白Sephadex G-75凝胶层析柱纯化 | 第44-46页 |
| ·抗菌活性测定结果 | 第46-47页 |
| 第五章 小结与展望 | 第47-49页 |
| ·主要结论 | 第47页 |
| ·存在的问题及展望 | 第47-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文及申请的专利 | 第54页 |
