| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 符号说明 | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-14页 |
| 1 3P-SIRNA的生物合成 | 第9-10页 |
| 2 3P-SIRNA的双功能效应 | 第10-11页 |
| ·3P-SIRNA沉默特异性的基因表达 | 第10页 |
| ·3P-SIRNA对RIG-Ⅰ信号通路的激活 | 第10-11页 |
| 3 3P-SIRNA的应用 | 第11-12页 |
| ·3P-SIRNA在抗肿瘤免疫治疗中的应用 | 第11-12页 |
| ·3P-SIRNA在抗病毒免疫治疗中的应用 | 第12页 |
| 4 总结与展望 | 第12-14页 |
| 第二章 实验材料及方法 | 第14-25页 |
| 1 实验材料 | 第14-17页 |
| ·细胞株 | 第14页 |
| ·质粒 | 第14页 |
| ·主要试剂 | 第14-15页 |
| ·主要仪器与设备 | 第15-16页 |
| ·寡核苷酸序列 | 第16页 |
| ·体外转录DNA模板 | 第16-17页 |
| ·体外转录试剂盒 | 第17页 |
| 2 实验方法 | 第17-25页 |
| ·化学合成SIRNA | 第17页 |
| ·体外转录法制备3P-SIRNA | 第17-19页 |
| ·细胞毒性检测 | 第19页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测法 | 第19-20页 |
| ·CIAP处理3P-SIRNA | 第20页 |
| ·WESTERN BLOT | 第20-21页 |
| ·ELISA方法检测HBSAG、HBEAG | 第21页 |
| ·荧光定量PCR检测方法检测HBV DNA | 第21-22页 |
| ·HBV MRNA表达水平检测 | 第22-25页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第25-45页 |
| 1 前言 | 第25-28页 |
| 2 实验结果 | 第28-41页 |
| ·3P-SIRNA的生物合成及其细胞毒性检测 | 第28-30页 |
| ·靶向HBV的SIRNA设计 | 第28页 |
| ·3P-SIRNA的制备 | 第28-29页 |
| ·3P-SIRNA对HEPG2.2.15细胞增殖的影响 | 第29-30页 |
| ·3P-SIRNA对RIG-Ⅰ介导的IFN通路的调节作用 | 第30-34页 |
| ·3P-SIRNA激活RIG-Ⅰ介导的IFN通路 | 第30-33页 |
| ·蹄选转染载体 | 第30-31页 |
| ·3P-SIRNA激活HEK293T细胞内RIG-Ⅰ介导的IFN通路 | 第31-32页 |
| ·3P-SIRNA诱导HEPG2.2.15细胞中RIG-Ⅰ介导的IFN表达 | 第32页 |
| ·3P-SIRNA激活干扰素刺激应答元件(ISRE) | 第32-33页 |
| ·5'PPP是3P-SIRNA激活IFN-β信号通路的关键基团 | 第33-34页 |
| ·3P-SIRNA抗乙型肝炎病毒生物学效应 | 第34-41页 |
| ·3P-SIRNA对HBV DNA和HBSAG、HBEAG表达的抑制作用 | 第34-36页 |
| ·3P-SIRNA对HBV MRNA的抑制作用 | 第36-37页 |
| ·5'PPP基团显著提高3P-SIRNA对HBV的抑制活性 | 第37页 |
| ·3P-SIRNA对HBV的抑制作用具有明显剂量效应 | 第37-38页 |
| ·靶向HBV不同阅读框(ORF)的3P-SIRNA对HBV复制的抑制作用 | 第38-39页 |
| ·3P-SIRNA抑制HBV的作用呈时间依赖性 | 第39-41页 |
| 3 讨论 | 第41-45页 |
| ·HBV感染及药物研究现状分析 | 第41-43页 |
| ·RIG-Ⅰ介导的IFN信号通路 | 第43-44页 |
| ·HBV特异性SIRNA | 第44页 |
| ·3p-siRNA抑制HBV的生物学效应分析 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 附录 各类试剂的配制 | 第50-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
