| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第1章 绪论 | 第9-19页 |
| ·LRP1B 基因概述 | 第9-15页 |
| ·LRP1B 的基因结构 | 第9-10页 |
| ·LRP1B 的蛋白结构 | 第10-11页 |
| ·LRP1B 的组织表达 | 第11页 |
| ·LRP1B 的体内失活机制 | 第11-12页 |
| ·LRP1B 的抑癌作用机制 | 第12-13页 |
| ·LRP1B 基因敲除小鼠的研究 | 第13-15页 |
| ·RNAi 技术 | 第15-18页 |
| ·RNAi 实验方法 | 第15-16页 |
| ·siRNA 序列设计 | 第16-18页 |
| ·本课题的研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 第2章 人LRP1B 基因siRNA 设计与重组体构建 | 第19-34页 |
| ·实验材料 | 第19-21页 |
| ·菌株和载体 | 第19-20页 |
| ·主要试剂和引物 | 第20页 |
| ·主要仪器和软件 | 第20-21页 |
| ·siRNA 打分软件─siRNA Score 的设计 | 第21-22页 |
| ·siRNA 序列设计 | 第22-24页 |
| ·设计步骤 | 第22-23页 |
| ·获得的siRNA 序列 | 第23-24页 |
| ·shRNA 重组体的构建和验证 | 第24-32页 |
| ·shRNA 重组体的构建 | 第24-28页 |
| ·shRNAs 重组体的验证 | 第28-31页 |
| ·阴性对照的设立 | 第31-32页 |
| ·针对大转录本基因的siRNA 设计策略 | 第32-33页 |
| ·本章小结 | 第33-34页 |
| 第3章 shRNA 重组体的稳定转染及单克隆的筛选 | 第34-43页 |
| ·实验材料 | 第34-35页 |
| ·细胞系 | 第34页 |
| ·重组体 | 第34页 |
| ·主要试剂和引物 | 第34-35页 |
| ·软件 | 第35页 |
| ·HEK 293 细胞中LRP1B 基因表达分析 | 第35-38页 |
| ·HEK 293 细胞总RNA 的提取 | 第35页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第35页 |
| ·内参GAPDH 的PCR 扩增 | 第35-36页 |
| ·LRP1B 的PCR 扩增 | 第36-37页 |
| ·GAPDH 与LRP1B 基因PCR 平台期的分析 | 第37-38页 |
| ·shRNA 重组体的稳定转染 | 第38页 |
| ·转染用shRNA 重组体质粒的纯化 | 第38页 |
| ·shRNA 重组体质粒的稳定转染 | 第38页 |
| ·单克隆细胞株的筛选 | 第38-39页 |
| ·半定量RT-PCR 检测各单克隆细胞株的基因沉默效果 | 第39-41页 |
| ·GAPDH 和LRP1B 基因的PCR 扩增 | 第39页 |
| ·LRP1B/GAPDH 基因相对表达量的统计 | 第39-41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| ·本章小结 | 第42-43页 |
| 第4章 LRP1B 基因沉默后HEK 293 细胞增殖、侵袭及趋化性运动能力等表型的变化 | 第43-55页 |
| ·实验材料 | 第43-44页 |
| ·细胞系 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·软件 | 第43-44页 |
| ·LRP1B 基因沉默后HEK 293 细胞生长能力的改变 | 第44-49页 |
| ·绘制细胞生长曲线 | 第44-45页 |
| ·软琼脂集落形成实验 | 第45-49页 |
| ·LRP1B 基因沉默后HEK 293 细胞转移能力的改变 | 第49-53页 |
| ·侵袭小室实验 | 第49-51页 |
| ·细胞趋化性运动实验 | 第51-53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| ·本章小结 | 第54-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 附录 1 软琼脂集落形成实验 SPSS 软件分析数据 | 第60-62页 |
| 附录 2 侵袭小室实验 SPSS 软件分析数据 | 第62-63页 |
| 附录 3 细胞趋化性运动实验 SPSS 软件分析数据 | 第63-64页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
