| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-20页 |
| 1. 猪繁殖与呼吸综合征病毒的发现历史及分类 | 第10页 |
| 2. 猪繁殖与呼吸综合征的研究进展 | 第10-16页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组 | 第10-12页 |
| ·病毒的变异 | 第12页 |
| ·PRRSV免疫学研究进展 | 第12-15页 |
| ·PRRSV ADE研究进展 | 第15-16页 |
| 3. PRRS流行病学特点 | 第16-17页 |
| 4 诊断方法的研究进展 | 第17-19页 |
| ·病毒的分离 | 第17页 |
| ·分子生物学检测 | 第17页 |
| ·病毒抗原检测 | 第17-18页 |
| ·血清学检测 | 第18-19页 |
| 5 研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 NSP7蛋白的表达与纯化 | 第20-36页 |
| 1 材料 | 第20-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第20页 |
| ·细胞 | 第20页 |
| ·病毒 | 第20-21页 |
| ·酶、菌种、质粒 | 第21页 |
| ·主要试剂的配制 | 第21-24页 |
| 2. 方法 | 第24-30页 |
| ·PRRSV BJ-4毒株总RNA的提取和cDNA的合成 | 第24-25页 |
| ·nsp7基因片段的扩增 | 第25-26页 |
| ·克隆载体PMD-19-T与nsp7的连接 | 第26页 |
| ·连接产物转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第26页 |
| ·重组质粒PMD-19-T-nsp7的筛选和鉴定 | 第26-28页 |
| ·原核表达载体pET28a-nsp7的构建 | 第28-29页 |
| ·重组质粒pET28a-nsp7在大肠杆菌中的诱导表达 | 第29页 |
| ·原核表达蛋白NSP7的纯化 | 第29页 |
| ·纯化蛋白SDS-PAGE鉴定 | 第29页 |
| ·纯化蛋白Western-blot分析 | 第29-30页 |
| 3 结果 | 第30-34页 |
| ·PRRSV BJ-4毒株总RNA的提取和cDNA的合成 | 第30-31页 |
| ·原核表达载体pET28a-nsp7的构建 | 第31页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·重组蛋白的纯化及Western-blot分析 | 第32-34页 |
| 4 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 PRRSV重组NSP7蛋白ELISA检测方法的建立 | 第36-46页 |
| 1 材料 | 第36-37页 |
| ·纯化重组NSP7蛋白 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·阳性血清和阴性血清 | 第36页 |
| ·待测血清 | 第36页 |
| ·主要试剂的配置 | 第36-37页 |
| 2 方法 | 第37-39页 |
| ·抗原包被浓度、血清稀释倍数的选择 | 第37页 |
| ·抗原包被条件的选择 | 第37页 |
| ·封闭条件的选择 | 第37-38页 |
| ·血清最佳反应时间的选择 | 第38页 |
| ·酶标二抗工作时间的选择 | 第38页 |
| ·酶标二抗工作浓度的选择 | 第38页 |
| ·间接ELISA检测临界值的确定 | 第38页 |
| ·间接ELISA检测方法的建立 | 第38页 |
| ·特异性实验 | 第38-39页 |
| ·重复性试验 | 第39页 |
| 3 结果 | 第39-44页 |
| ·抗原的最佳包被浓度、血清最佳稀释倍数 | 第39-40页 |
| ·抗原包被条件的选择 | 第40页 |
| ·封闭条件的选择 | 第40-41页 |
| ·血清最佳反应时间的选择 | 第41-42页 |
| ·酶标二抗工作时间的选择 | 第42页 |
| ·酶标二抗工作浓度的选择 | 第42-43页 |
| ·间接ELISA检测临界值的确定 | 第43页 |
| ·间接ELISA检测方法的建立 | 第43页 |
| ·特异性实验 | 第43-44页 |
| ·重复性试验 | 第44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 附录：英文缩略词表 | 第52-53页 |
| 作者简历 | 第53-54页 |
| 硕士在读期间撰写和已发表的论文 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
