| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-14页 |
| 第一章 麻疯树脂酶全长基因克隆及其在大肠杆菌中的表达 | 第14-30页 |
| 1.材料与方法 | 第14-21页 |
| ·实验材料 | 第14-15页 |
| ·菌种和载体 | 第14页 |
| ·酶制剂 | 第14页 |
| ·试剂盒 | 第14-15页 |
| ·常用培养基和缓冲液 | 第15页 |
| ·实验方法 | 第15-21页 |
| ·麻疯树的组培 | 第15页 |
| ·麻疯树总RNA分离 | 第15-16页 |
| ·麻疯树脂酶全长基因EST引物设计 | 第16页 |
| ·麻疯树脂酶全长基因EST扩增 | 第16-17页 |
| ·麻疯树脂酶全长基因cDNA3’RACE扩增3’端未知序列 | 第17-19页 |
| ·麻疯树脂酶全长基因cDNA 5’RACE引物设计 | 第19页 |
| ·麻疯树脂酶全长基因cDNA 5’RACE扩增5’端未知序列 | 第19-20页 |
| ·麻疯树脂酶全长基因全长cDNA序列拼接 | 第20页 |
| ·麻疯树脂酶全长基因ORF的验证 | 第20页 |
| ·麻疯树脂酶全长基因内部EcoRI酶切位点的消除 | 第20-21页 |
| ·麻疯树脂酶重组表达质粒的构建 | 第21页 |
| ·麻疯树脂酶在大肠杆菌中的诱导表达 | 第21页 |
| ·表达产物的活性测定 | 第21页 |
| 2.结果与分析 | 第21-25页 |
| ·麻疯树脂酶JcLIP基因EST验证 | 第21-23页 |
| ·麻疯树脂酶JcLIP基因cDNA 3’RACE | 第23-24页 |
| ·麻疯树脂酶JcLIP基因cDNA 5’RACE | 第24页 |
| ·麻疯树脂酶JcLIP基因全长cDNA拼接以及编码框验证 | 第24页 |
| ·麻疯树JcLIP基因在大肠杆菌中表达 | 第24-25页 |
| ·麻疯树JcLIP基因在大肠杆菌中表达产物酶活的测定 | 第25页 |
| 3.讨论 | 第25-29页 |
| ·通过EST进行基因克隆的策略 | 第25-28页 |
| ·应用快速扩增cDNA末端(Rapid Amplification of cDNA Ends,RACE)方法获得麻疯树JcLIP全长基因 | 第28页 |
| ·麻疯树JcLIP全长基因在大肠杆菌中的表达策略 | 第28-29页 |
| 4.小结 | 第29-30页 |
| 第二章 麻疯树脂酶基因生物信息学分析预测 | 第30-48页 |
| 1.分析方法 | 第30-31页 |
| ·核苷酸序列分析 | 第30页 |
| ·核酸GC含量分布 | 第30页 |
| ·起始ATG的预测 | 第30页 |
| ·加A信号位点预测 | 第30页 |
| ·相似性搜索 | 第30页 |
| ·多重序列比对 | 第30页 |
| ·蛋白质序列分析 | 第30-31页 |
| ·基于一级结构的蛋白质性质 | 第30页 |
| ·蛋白质序列亲疏水性分析 | 第30页 |
| ·数据库搜索 | 第30-31页 |
| ·功能结构域的确定 | 第31页 |
| ·二级结构预测 | 第31页 |
| ·三级结构预测 | 第31页 |
| ·蛋白质家族分析 | 第31页 |
| ·系统发育分析 | 第31页 |
| 2.结果与分析 | 第31-45页 |
| ·核苷酸序列分析 | 第31-33页 |
| ·核酸GC含量分布 | 第31-32页 |
| ·起始ATG的预测 | 第32页 |
| ·加A信号位点预测 | 第32-33页 |
| ·相似性搜索 | 第33页 |
| ·多重序列比对 | 第33页 |
| ·蛋白质序列分析以及结构预测 | 第33-45页 |
| ·基于一级结构的蛋白质性质 | 第33-34页 |
| ·蛋白质序列亲疏水性分析 | 第34-35页 |
| ·数据库搜索 | 第35-36页 |
| ·功能结构域的确定 | 第36-37页 |
| ·二级结构预测 | 第37页 |
| ·三级结构预测 | 第37-40页 |
| ·蛋白质家族分析 | 第40-41页 |
| ·系统发育分析 | 第41-45页 |
| 3.讨论 | 第45-47页 |
| ·对麻疯树脂肪酶生物信息学分析策略 | 第45-46页 |
| ·麻疯树脂酶的结构及功能预测 | 第46-47页 |
| 4.小结 | 第47-48页 |
| 第三章 新型酵母表达系统——粉状毕赤酵母表达系统构建 | 第48-63页 |
| 1.材料与方法 | 第48-53页 |
| ·实验材料 | 第48-49页 |
| ·菌种 | 第48页 |
| ·载体 | 第48页 |
| ·工具酶 | 第48页 |
| ·试剂盒 | 第48-49页 |
| ·实验方法 | 第49-53页 |
| ·粉状毕赤酵母与巴斯德毕赤酵母生长特性的研究 | 第49页 |
| ·粉状毕赤酵母抗性研究 | 第49页 |
| ·粉状毕赤酵母整合型载体的构建 | 第49-50页 |
| ·粉状毕赤酵母整合型载体中抗性基因的合成 | 第49页 |
| ·粉状毕赤酵母整合型中间载体构建 | 第49-50页 |
| ·粉状毕赤酵母整合型载体的整合位点获得 | 第50页 |
| ·粉状毕赤酵母整合型载体的获得 | 第50页 |
| ·粉状毕赤酵母高效感受态细胞制备 | 第50-51页 |
| ·粉状毕赤酵母高效电击转化 | 第51页 |
| ·粉状毕赤酵母阳性克隆验证 | 第51-52页 |
| ·粉状毕赤酵母阳性克隆遗传稳定性验证 | 第52-53页 |
| 2.结果与分析 | 第53-59页 |
| ·粉状毕赤酵母与巴斯德毕赤酵母生长特性的研究 | 第53页 |
| ·粉状毕赤酵母抗性研究 | 第53-54页 |
| ·粉状毕赤酵母ura3基因的克隆 | 第54页 |
| ·粉状毕赤酵母整合型载体的构建 | 第54-56页 |
| ·粉状毕赤酵母转化系统的构建 | 第56-58页 |
| ·不同载体对酵母转化的影响 | 第56页 |
| ·酵母感受态细胞制备及其优化 | 第56-57页 |
| ·粉状毕赤酵母电转化条件的优化 | 第57-58页 |
| ·粉状毕赤酵母阳性克隆的检测和遗传稳定性研究 | 第58-59页 |
| 3.讨论 | 第59-62页 |
| ·新型表达系统的开发 | 第59-60页 |
| ·酵母感受态制备策略 | 第60-62页 |
| 4.小结 | 第62-63页 |
| 第四章 麻疯树脂酶在粉状毕赤酵母中表达的初步研究 | 第63-71页 |
| 1.材料与方法 | 第63-65页 |
| ·实验材料 | 第63页 |
| ·菌种 | 第63页 |
| ·载体 | 第63页 |
| ·工具酶 | 第63页 |
| ·试剂盒 | 第63页 |
| ·实验方法 | 第63-65页 |
| ·麻疯树脂酶基因全长ORF的改造 | 第63页 |
| ·麻疯树脂酶表达载体的构建 | 第63页 |
| ·麻疯树脂酶表达载体pKU-JcLIP的转化 | 第63-64页 |
| ·粉状毕赤酵母阳性克隆验证 | 第64页 |
| ·麻疯树脂肪酶在粉状毕赤酵母中的表达研究 | 第64-65页 |
| ·麻疯树脂肪酶在粉状毕赤酵母中的表达RNA水平研究 | 第64-65页 |
| ·麻疯树脂肪酶在粉状毕赤酵母中的表达蛋白质水平研究 | 第65页 |
| ·麻疯树脂肪酶在粉状毕赤酵母中的酶活研究 | 第65页 |
| 2.结果与分析 | 第65-68页 |
| ·麻疯树脂酶JcLIP基因的改造及表达载体的构建 | 第65-66页 |
| ·麻疯树脂酶JcLIP基因表达的转录水平的研究 | 第66-67页 |
| ·麻疯树脂酶JcLIP基因表达的蛋白质水平的研究 | 第67页 |
| ·麻疯树脂酶JcLIP基因表达的酶活研究 | 第67-68页 |
| 3.讨论 | 第68-70页 |
| 4.小结 | 第70-71页 |
| 第五章 Lipase催化产生生物柴油的转脂反应 | 第71-84页 |
| 1.材料与方法 | 第71-73页 |
| ·材料 | 第71-72页 |
| ·反应用油 | 第71页 |
| ·Lipase酶制剂 | 第71页 |
| ·气相色谱标准品 | 第71-72页 |
| ·其他试剂 | 第72页 |
| ·方法 | 第72-73页 |
| ·粉状毕赤酵母全细胞催化剂的制备 | 第72页 |
| ·催化反应 | 第72-73页 |
| ·气相色谱分析 | 第73页 |
| 2、实验结果 | 第73-80页 |
| ·反应结束后样品的变化 | 第73页 |
| ·气相色谱分析结果 | 第73-79页 |
| ·各样品反应结束后的酯转化率 | 第79-80页 |
| 3、讨论 | 第80-83页 |
| 4、小结 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-87页 |
| 综述 可再生资源在生物柴油研究中的应用 | 第87-125页 |
| 一、生物柴油的研究进展 | 第88-97页 |
| 1.生物柴油的特性 | 第88-90页 |
| ·生物柴油的理化性质 | 第88-89页 |
| ·尾气排放物 | 第89-90页 |
| ·生产生物柴油的能耗 | 第90页 |
| ·排放物对人体的影响 | 第90页 |
| 2.生物柴油的发展史 | 第90-91页 |
| 3.生物柴油的合成方法 | 第91-96页 |
| ·直接混合法 | 第91-92页 |
| ·微乳液法 | 第92页 |
| ·高温热裂解法 | 第92-93页 |
| ·酯交换法 | 第93-96页 |
| 4.生物柴油在各国家的应用 | 第96-97页 |
| ·美国 | 第96-97页 |
| ·欧洲国家 | 第97页 |
| ·其他国家 | 第97页 |
| 二、可再生资源的在生物柴油中的应用 | 第97-108页 |
| 1.能源植物 | 第97-103页 |
| ·大豆 | 第98-100页 |
| ·油菜 | 第100页 |
| ·麻疯树 | 第100-101页 |
| ·棕榈树 | 第101页 |
| ·油茶 | 第101页 |
| ·橡树 | 第101-102页 |
| ·油桐 | 第102页 |
| ·黄连木 | 第102页 |
| ·光皮树 | 第102-103页 |
| 2.藻类资源 | 第103-106页 |
| 3.微生物资源 | 第106-108页 |
| 三、生物技术在生物柴油领域中的应用 | 第108-115页 |
| 1.生物技术对脂肪酶在生物柴油中应用的影响 | 第108-113页 |
| ·固定化酶技术在生物柴油生产中的应用 | 第108-110页 |
| ·全细胞生物催化剂在生物柴油生产中的应用 | 第110-112页 |
| ·新酶的发现 | 第112-113页 |
| 2.基因工程技术对油料资源产生的影响 | 第113-115页 |
| ·基因工程技术改造油料作物的脂肪酸代谢 | 第113-114页 |
| ·基因工程技术在新型生物柴油细胞反应器中的应用 | 第114-115页 |
| 四、展望 | 第115页 |
| 参考文献 | 第115-125页 |
| 致谢 | 第125-126页 |
| 在攻读学位期间发表的论文 | 第126-127页 |
