| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 论文 | 第14-80页 |
| 第一章 盐生杜氏藻3-磷酸甘油脱氢酶同工酶基因的克隆及序列分析 | 第14-32页 |
| 1. 材料与方法 | 第14-24页 |
| ·实验材料 | 第14-15页 |
| ·菌种 | 第14页 |
| ·藻种 | 第14-15页 |
| ·酶和试剂盒 | 第15页 |
| ·实验方法 | 第15-24页 |
| ·EST的克隆 | 第15-16页 |
| ·GPDH基因EST引物的设计 | 第16页 |
| ·盐藻总RNA的提取 | 第16-17页 |
| ·反转录 | 第17-18页 |
| ·3’端序列的克隆 | 第18-20页 |
| ·5’RACE的引物设计 | 第20页 |
| ·5’端序列的克隆 | 第20-24页 |
| ·全长cDNA序列拼接 | 第24页 |
| ·全长cDNA的ORF的验证 | 第24页 |
| 2 结果与分析 | 第24-29页 |
| ·GPDH1和GPDH3的EST的克隆 | 第24-25页 |
| ·GPDH1和GPDH3的3’端序列的克隆 | 第25页 |
| ·GPDH1和GPDH3的5’端序列的克隆 | 第25-26页 |
| ·GPDH1和GPDH2的SerB结构域的氨基酸序列比对 | 第26-27页 |
| ·GPDH1和GPDH2的GPD结构域的氨基酸序列比对 | 第27-28页 |
| ·GPDH3的序列分析 | 第28-29页 |
| 3. 讨论 | 第29-32页 |
| ·GPDH1和GPDH2的序列比较及功能预测 | 第29-32页 |
| 第二章 盐生杜氏藻3-磷酸甘油脱氢酶同工酶基因的表达及细胞的甘油动态合成 | 第32-47页 |
| 1. 材料与方法 | 第32-38页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·藻种 | 第32页 |
| ·酶和试剂盒 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-38页 |
| ·各种胁迫处理 | 第33页 |
| ·盐藻总RNA的提取 | 第33页 |
| ·反转录 | 第33-34页 |
| ·Realtime PCR的引物设计 | 第34页 |
| ·标准曲线制作 | 第34-35页 |
| ·样品的realtime PCR反应 | 第35页 |
| ·相对定量的计算方法 | 第35-36页 |
| ·Northern杂交 | 第36-37页 |
| ·盐藻细胞甘油含量的测定 | 第37页 |
| ·盐藻细胞湿重的计算 | 第37-38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-45页 |
| ·标准曲线 | 第38-39页 |
| ·样品的realtime PCR反应结果与分析 | 第39-43页 |
| ·Northern杂交结果(GPDH2)与分析 | 第43-44页 |
| ·甘油合成的动态变化 | 第44-45页 |
| 3 讨论 | 第45-47页 |
| 第三章 盐生杜氏藻3-磷酸甘油脱氢酶基因的原核表达及酶学分析 | 第47-59页 |
| 1 材料与方法 | 第47-52页 |
| ·材料 | 第47-48页 |
| ·菌种 | 第47页 |
| ·质粒 | 第47页 |
| ·载体 | 第47-48页 |
| ·酶制剂 | 第48页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第48页 |
| ·层析柱子 | 第48页 |
| ·仪器设备 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-52页 |
| ·大肠杆菌表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第49-50页 |
| ·一步亲和层析纯化 | 第50页 |
| ·蛋白质含量的测定及 SDS-PAGE电泳 | 第50页 |
| ·重组蛋白GPDH2的GPD活性测定方法 | 第50-51页 |
| ·气相色谱检测 GPDH2反应液中的甘油含量 | 第51-52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-58页 |
| ·载体pET-gpdh2的构建及转化 | 第52页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第52-53页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第53-54页 |
| ·GPDH2反应液中甘油含量的测定 | 第54-58页 |
| 3 讨论 | 第58-59页 |
| 第四章 3-磷酸甘油脱氢酶同工酶基因的产生机制研究 | 第59-74页 |
| 1. 材料与方法 | 第59-68页 |
| ·实验材料 | 第59-60页 |
| ·藻种 | 第59页 |
| ·菌种 | 第59-60页 |
| ·酶和试剂盒 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-63页 |
| ·GPDH1和 GPDH2的基因序列克隆 | 第60-62页 |
| ·基因组 DNA杂交(Southern blotting) | 第62-63页 |
| Procedure | 第63-68页 |
| 2 结果与分析 | 第68-74页 |
| ·GPDH1和GPDH2的基因组序列克隆 | 第68-69页 |
| ·GPDH1和 GPDH2的基因组结构比较 | 第69-71页 |
| ·GPDH1和 GPDH2的GPD结构域的基因组结构(外显子和内含子)比较 | 第69-70页 |
| ·GPDH1和GPDH2的SerB结构域的基因组结构(外显子和内含子)比较 | 第70-71页 |
| ·基因组Southern杂交 | 第71-74页 |
| 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-77页 |
| 在读期间科研成果简介 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 综述 | 第80-99页 |
| 盐藻一种重要的模式物种-盐藻的研究现状及未来发展方向 | 第80-99页 |
| 1. 杜氏藻研究概况 | 第80-83页 |
| ·杜氏藻属的分类 | 第80-81页 |
| ·杜氏藻的类胡萝卜素 | 第81页 |
| ·杜氏藻的耐盐能力 | 第81-82页 |
| ·杜氏藻细胞对渗透的行为 | 第82页 |
| ·杜氏藻细胞内的盐和溶质的浓度 | 第82-83页 |
| ·采用蛋白质组学的方法研究盐藻的耐盐 | 第83页 |
| 2 盐藻研究的发展方向 | 第83-93页 |
| ·基因进化 | 第84-90页 |
| ·新基因产生的分子机制 | 第84-85页 |
| ·新基因的进化 | 第85-87页 |
| ·新生基因的命运 | 第85-86页 |
| ·新基因的加速进化 | 第86-87页 |
| ·新基因产生的频率 | 第87-88页 |
| ·新基因产生的X染色体偏好性 | 第88-89页 |
| ·总结和展望 | 第89-90页 |
| ·比较基因组学 | 第90-93页 |
| ·基因组结构的进化 | 第90页 |
| ·基因组功能的进化 | 第90-91页 |
| ·群体基因组学和系统基因组学 | 第91-92页 |
| ·比较的方法和基因组的功能注释 | 第92页 |
| ·前景 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-99页 |
| 附录 | 第99-102页 |
