| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-8页 |
| 英文缩略词 | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-11页 |
| 技术路线 | 第11-12页 |
| 实验材料与方法 | 第12-34页 |
| 一.实验材料 | 第12-21页 |
| 1.细胞系 | 第12页 |
| 2.载体 | 第12-13页 |
| 3.菌种 | 第13-14页 |
| 4.PCR引物 | 第14页 |
| 5.抗体 | 第14页 |
| 6.插入序列 | 第14-15页 |
| 7.本实验所用的试剂盒 | 第15-16页 |
| 8.其他主要试剂 | 第16页 |
| 9.主要仪器设备 | 第16-17页 |
| 10.常用贮存液、缓冲液及培养液 | 第17-21页 |
| 11.实验中所用生物医学软件 | 第21页 |
| 二.实验方法 | 第21-34页 |
| (一) 载体构建 | 第21-29页 |
| (二) 细胞培养与质粒转染 | 第29-30页 |
| (三) 流式细胞学或倒置荧光显微镜检测细胞绿色荧光强度 | 第30页 |
| (四) Western blot检测蛋白表达 | 第30-31页 |
| (五) 处理组和未处理组的细胞生长情况的检测 | 第31-32页 |
| (六) 处理组和未处理组的细胞凋亡情况的检测 | 第32页 |
| (七) 处理组和未处理组的细胞侵袭能力的检测 | 第32-33页 |
| (八) 统计分析 | 第33-34页 |
| 结果 | 第34-45页 |
| 第一部分 载体的构建和检验 | 第34-40页 |
| 一、重组pcDNA4.0-EGFP载体的构建 | 第34-38页 |
| 二、重组pcDNA4.0-EGFP-miR-181a载体构建 | 第38-40页 |
| 第二部分 重组质粒转染细胞 | 第40-41页 |
| 1.细胞分组 | 第40页 |
| 2.倒置荧光显微镜观察瞬时转染效率 | 第40-41页 |
| 第三部分 Western blot检测转染后细胞K-RAS蛋白表达 | 第41-42页 |
| 第四部分 转染后细胞生长、凋亡、侵袭能力的变化 | 第42-45页 |
| 1、处理组和未处理组细胞生长情况的监测 | 第42-43页 |
| 2、处理组和未处理组细胞凋亡情况的监测 | 第43-44页 |
| 3、处理组和未处理组细胞侵袭情况的监测 | 第44-45页 |
| 讨论 | 第45-49页 |
| 一、构建重组载体pcDNA4.0-EGFP和pcDNA4.0-EGFP-miR-181a | 第45页 |
| 二、miR-181a对胰腺癌细胞的作用 | 第45-46页 |
| 三、胰腺癌中miRNA的作用 | 第46-47页 |
| 四、下一步研究计划 | 第47-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 综述 miRNA在肿瘤中作用的进展 | 第54-67页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
