| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 中文文摘 | 第4-8页 |
| 第1章 绪论 | 第8-20页 |
| ·番鸭呼肠孤病毒研究进展 | 第8-12页 |
| ·番鸭呼肠孤病毒病简介 | 第8页 |
| ·病原学研究 | 第8页 |
| ·病毒特性 | 第8-9页 |
| ·分子生物学特征 | 第9-10页 |
| ·病毒基因组 | 第9页 |
| ·病毒蛋白及其功能研究 | 第9-10页 |
| ·病理变化 | 第10-11页 |
| ·分类地位 | 第11页 |
| ·诊断与疫苗研究 | 第11-12页 |
| ·腺病毒载体研究状况 | 第12-20页 |
| ·腺病毒简介 | 第12页 |
| ·腺病毒的基因组结构 | 第12-13页 |
| ·病毒的感染周期 | 第13-14页 |
| ·腺病毒载体的优点 | 第14页 |
| ·腺病毒载体的构建策略 | 第14-18页 |
| ·腺病毒载体系统简介 | 第14-15页 |
| ·细胞内质粒同源重组法 | 第15页 |
| ·大肠杆菌内质粒同源重组法 | 第15-17页 |
| ·第三代腺病毒载体 | 第17-18页 |
| ·基因工程疫苗与腺病毒载体的应用 | 第18-20页 |
| 第2章 材料与方法 | 第20-36页 |
| ·材料 | 第20-23页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·载体、菌株及细胞系 | 第20页 |
| ·载体及菌株 | 第20页 |
| ·细胞系 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20-21页 |
| ·常用试剂配制 | 第21-23页 |
| ·方法 | 第23-36页 |
| ·腺病毒载体系统完整性的验证 | 第23-25页 |
| ·穿梭载体pShuttle-CMV的验证 | 第23-24页 |
| ·骨架载体pAdEasy-1的验证 | 第24-25页 |
| ·目的基因的制备 | 第25-28页 |
| ·引物的设计 | 第25-26页 |
| ·目的片段的扩增 | 第26页 |
| ·目的片段Kpn I酶切位点的引入 | 第26-28页 |
| ·重组载体pShuttle-CMV-σC的构建 | 第28-30页 |
| ·目的片段和穿梭载体的双酶切及回收 | 第28页 |
| ·重组载体pShuttle-CMV-σC的构建 | 第28-29页 |
| ·重组克隆株pShuttle-CMV-σC的鉴定 | 第29-30页 |
| ·同源重组腺病毒载体pAdCMV-σC的构建 | 第30-33页 |
| ·BJ5183(pAdEasy-1)电转化感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·重组载体pShuttle-CMV-σC的线性化及去磷酸化 | 第30-31页 |
| ·线性化的重组载体pShuttle-CMV-σC电转化BJ5183(pAdEasy-1)感受态细胞 | 第31页 |
| ·同源重组腺病毒载体pAdCMV-σC阳性克隆株的筛选与鉴定 | 第31-32页 |
| ·阳性重组腺病毒载体pAdCMV-σC质粒的大量扩增 | 第32-33页 |
| ·重组腺病毒载体pAdCMV-σC在AD293细胞上的组装 | 第33-34页 |
| ·线性化pAdCMV-σC的制备 | 第33页 |
| ·线性化重组腺病毒载体pAdCMV-σC转染AD293细胞 | 第33-34页 |
| ·重组腺病毒vAdCMV-σC DNA水平上的鉴定 | 第34页 |
| ·重组腺病毒vAdCMV-σC的扩增、滴度测定及遗传稳定性分析 | 第34页 |
| ·重组腺病毒vAdCMV-σC的扩增 | 第34页 |
| ·重组腺病毒vAdCMV-σC滴度测定 | 第34页 |
| ·重组腺病毒vAdCMV-σC遗传稳定性分析 | 第34页 |
| ·重组腺病毒vAdCMV-σC转录产物mRNA的分析 | 第34-36页 |
| 第3章 结果与分析 | 第36-46页 |
| ·腺病毒载体系统完整性的验证 | 第36-37页 |
| ·穿梭载体pShuttle-CMV的验证 | 第36页 |
| ·骨架载体pAdEasy-1的验证 | 第36-37页 |
| ·重组载体pShuttle-CMV-σC的构建 | 第37-39页 |
| ·目的基因的制备 | 第37-38页 |
| ·重组载体pShuttle-CMV-σC的构建 | 第38-39页 |
| ·重组腺病毒载体pAdCMV-σC的构建 | 第39-41页 |
| ·重组腺病毒vAdCMV-σC的组装与鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组腺病毒vAdCMV-σC滴度测定及遗传稳定性分析 | 第42-43页 |
| ·重组腺病毒vAdCMV-σC滴度测定 | 第42-43页 |
| ·重组腺病毒vAdCMV-σC遗传稳定性分析 | 第43页 |
| ·重组腺病毒vAdCMV-σC转录产物mRNA的分析 | 第43-46页 |
| ·重组腺病毒vAdCMV-σC转录产物RT-PCR扩增结果 | 第43-44页 |
| ·重组腺病毒vAdCMV-σC转录产物的分析 | 第44-46页 |
| 第4章 讨论 | 第46-50页 |
| ·载体的选择 | 第46页 |
| ·AdEasy XL腺病毒载体系统 | 第46-47页 |
| ·重组病毒载体的构建与组装 | 第47-49页 |
| ·重组病毒的滴度测定 | 第49页 |
| ·重组病毒DNA和mRNA转录水平上的分析 | 第49-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 附录Ⅰ | 第51-53页 |
| 附录Ⅱ | 第53-58页 |
| 附录Ⅲ | 第58-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 个人简历 | 第67-68页 |
