| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-16页 |
| 第一章 体外培养细胞的永生化 | 第16-27页 |
| ·永生化的概念和永生化细胞的特性 | 第16页 |
| ·细胞永生化的机理 | 第16-21页 |
| ·端粒、端粒酶与永生化 | 第16-18页 |
| ·p16~(INK4a)-CDK4/6-cyclin D-Rb-E2F 信号通路与永生化 | 第18-19页 |
| ·p14ARF－MDM2-p53 信号通路与永生化 | 第19-20页 |
| ·表观遗传与永生化 | 第20-21页 |
| ·细胞永生化的方法 | 第21-24页 |
| ·理化因素 | 第21页 |
| ·转染病毒 | 第21-23页 |
| ·转染原癌基因 | 第23页 |
| ·转染TERT 基因 | 第23-24页 |
| ·其他 | 第24页 |
| ·细胞癌变与永生化 | 第24-25页 |
| ·永生化的应用以及存在的问题 | 第25-27页 |
| ·细胞分化与肿瘤发生的分子机制研究 | 第25页 |
| ·细胞治疗与生物人工器官 | 第25-26页 |
| ·药物代谢与毒理研究 | 第26页 |
| ·生产转基因动物中的潜在应用价值 | 第26-27页 |
| 第二章 影响体细胞核移植效率的因素 | 第27-37页 |
| ·胚胎凋亡与体细胞核移植 | 第27-30页 |
| ·胚胎凋亡的影响因素 | 第27-29页 |
| ·胚胎凋亡的检测 | 第29-30页 |
| ·供体细胞与体细胞核移 | 第30-32页 |
| ·细胞的传代次数对核移植的影响 | 第30页 |
| ·供体细胞的组织来源对核移植的影响 | 第30页 |
| ·细胞周期阶段对核移植的影响 | 第30-31页 |
| ·使核供体与受体卵母细胞相协调 | 第31页 |
| ·核的重编程 | 第31-32页 |
| ·卵母细胞成熟 | 第32-33页 |
| ·卵母细胞成熟的形态变化 | 第32页 |
| ·卵母细胞成熟的影响因素 | 第32-33页 |
| ·卵母细胞成熟的调控因子 | 第33页 |
| ·重构胚激活与体细胞核移植 | 第33-35页 |
| ·物理激活 | 第34页 |
| ·化学激活 | 第34页 |
| ·精子提取物激活 | 第34-35页 |
| ·胚胎培养与体细胞核移植 | 第35页 |
| ·胚胎的冷冻保存 | 第35-37页 |
| ·冷冻保护剂的种类 | 第35-36页 |
| ·影响胚胎冷冻的其它因素 | 第36页 |
| ·影响冷冻效果的其他因素 | 第36-37页 |
| 前言 | 第37-38页 |
| 第三章 人端粒酶催化亚基转染牛耳成纤维细胞 | 第38-48页 |
| ·材料 | 第38-39页 |
| ·细胞来源 | 第38页 |
| ·试剂与用品 | 第38-39页 |
| ·方法 | 第39-41页 |
| ·原代细胞培养和G418 致死浓度筛选 | 第39页 |
| ·脂质体法转染pEGFP-hTERT 基因 | 第39页 |
| ·抗性细胞克隆的挑取和保存 | 第39-40页 |
| ·RT-PCR 检测 | 第40页 |
| ·端粒酶活性检测 | 第40页 |
| ·Western Blotting 检测 | 第40-41页 |
| ·细胞软琼脂生长分析 | 第41页 |
| ·染色体条带分析 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-45页 |
| ·基因转染与阳性单克隆的挑选 | 第41-42页 |
| ·RT-PCR 检测阳性细胞克隆在m RNA 水平的表达 | 第42页 |
| ·细胞端粒酶活性的检测 | 第42页 |
| ·细胞端粒酶催化亚基的Western Blotting 分析 | 第42-43页 |
| ·阳性细胞克隆HBC3 细胞系的传代 | 第43-44页 |
| ·HBC3 细胞软琼脂生长分析 | 第44页 |
| ·HBC3 细胞染色体条带分析 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| ·结论 | 第46-48页 |
| 第四章 HBC3 细胞系的生物学特性检测和核移植 | 第48-60页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·卵巢来源 | 第48页 |
| ·试剂药品 | 第48-49页 |
| ·方法 | 第49-51页 |
| ·EGF 和胰岛素对HBC3 生长的影响 | 第49页 |
| ·血清饥饿对HBC3 生长和凋亡的影响 | 第49页 |
| ·流式细胞仪检测BFC 和HBC3 细胞的凋亡 | 第49页 |
| ·HBC3 的体细胞核移植 | 第49-51页 |
| ·囊胚细胞计数和凋亡的影响 | 第51页 |
| ·统计方法 | 第51页 |
| ·结果与分析 | 第51-57页 |
| ·EGF 和胰岛素对HBC3 生长的影响 | 第51-52页 |
| ·血清饥饿对HBC3 生长和凋亡的影响 | 第52-53页 |
| ·流式细胞仪检测HBC3 细胞的凋亡 | 第53-54页 |
| ·不同供体细胞的核移植 | 第54-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| ·HBC3 的生物学特性 | 第57-58页 |
| ·端粒酶活性与核移植重构胚的发育 | 第58-59页 |
| ·结论 | 第59-60页 |
| 第五章 细胞癌化对体细胞核移植的影响 | 第60-70页 |
| ·材料 | 第60-61页 |
| ·卵巢来源 | 第60页 |
| ·试剂仪器 | 第60-61页 |
| ·方法 | 第61-63页 |
| ·牛耳成纤维细胞的化学致癌物处理 | 第61页 |
| ·ABF11 和ABF12 癌化细胞系的分离和形态观察 | 第61页 |
| ·ABF11 和ABF12 的端粒酶活性检测 | 第61页 |
| ·ABF12 生长曲线的测定 | 第61页 |
| ·血清饥饿对ABF12 生长和凋亡的影响 | 第61-62页 |
| ·ABF12 的软琼脂生长试验 | 第62页 |
| ·ABF12 的染色体条带分析 | 第62页 |
| ·ABF12 的体细胞核移植试验 | 第62-63页 |
| ·囊胚细胞计数和凋亡染色 | 第63页 |
| ·统计方法 | 第63页 |
| ·结果与分析 | 第63-69页 |
| ·ABF11 和ABF12 细胞系的建立和形态观察 | 第63页 |
| ·ABF11 和ABF12 的端粒酶活性检测 | 第63页 |
| ·ABF12 生长曲线 | 第63-65页 |
| ·血清饥饿对ABF12 生长的影响 | 第65-66页 |
| ·ABF12 的软琼脂生长试验 | 第66页 |
| ·ABF12 的染色体条带分析 | 第66-67页 |
| ·ABF12 的体细胞核移植试验 | 第67-69页 |
| ·讨论 | 第69页 |
| ·结论 | 第69-70页 |
| 第六章 卵母细胞体外成熟对体细胞核移植的影响 | 第70-80页 |
| ·材料 | 第70-71页 |
| ·卵巢来源 | 第70页 |
| ·试剂仪器 | 第70-71页 |
| ·方法 | 第71-72页 |
| ·卵母细胞的采集 | 第71页 |
| ·卵母细胞体外成熟培养 | 第71页 |
| ·卵母细胞的去核操作 | 第71页 |
| ·供体细胞的准备 | 第71页 |
| ·透明带下注射法核移植 | 第71页 |
| ·核移植胚胎的激活 | 第71页 |
| ·核移植胚胎的体外培养 | 第71-72页 |
| ·卵母细胞的程序化冷冻 | 第72页 |
| ·卵母细胞的体外受精和培养 | 第72页 |
| ·胚胎细胞计数与凋亡染色 | 第72页 |
| ·统计方法 | 第72页 |
| ·结果与分析 | 第72-78页 |
| ·成熟培养液中添加EGF 对卵母细胞成熟和胚胎发育的影响 | 第72-74页 |
| ·成熟培养液中添加VE 对卵母细胞成熟和胚胎发育的影响 | 第74-76页 |
| ·成熟培养液中添加血清对卵母细胞成熟和胚胎发育的影响 | 第76-78页 |
| ·讨论 | 第78-79页 |
| ·结论 | 第79-80页 |
| 第七章 核移植胚胎的激活和发育阻滞 | 第80-92页 |
| ·材料 | 第80-81页 |
| ·卵巢来源 | 第80页 |
| ·精子提取物的获得 | 第80-81页 |
| ·试剂仪器 | 第81页 |
| ·方法 | 第81-83页 |
| ·卵母细胞的采集和成熟培养 | 第81页 |
| ·卵母细胞的去核操作 | 第81页 |
| ·供体细胞的准备 | 第81页 |
| ·核移植重构胚胎的构建 | 第81-82页 |
| ·核移植胚胎的激活方法的比较 | 第82页 |
| ·核移植胚胎的体外培养 | 第82页 |
| ·孤雌激活胚胎与核移植胚胎体外发育阻滞的比较 | 第82页 |
| ·体外受精胚胎与核移植胚胎体外发育阻滞的比较 | 第82页 |
| ·胚胎细胞计数与凋亡染色 | 第82-83页 |
| ·与统计分析 | 第83页 |
| ·结果与分析 | 第83-88页 |
| ·不同浓度精子提取物对体细胞核移植胚胎激活的效果 | 第83-84页 |
| ·精子提取物结合电化学方法激活对核移植胚胎体外发育的影响 | 第84页 |
| ·电激活和化学激活方法对牛体细胞核移植体外发育的影响 | 第84-87页 |
| ·孤雌激活胚胎与核移植胚胎体外发育阻滞的比较 | 第87-88页 |
| ·体外受精胚胎与核移植胚胎体外发育阻滞的比较 | 第88页 |
| ·讨论 | 第88-90页 |
| ·精子提取物对体细胞核移植胚胎的激活 | 第88-89页 |
| ·精子提取物与电化学方法的激活效果比较 | 第89-90页 |
| ·体细胞重构胚体外发育的阻滞 | 第90页 |
| ·结论 | 第90-92页 |
| 第八章 重构核移植胚胎的体外培养和冷冻 | 第92-103页 |
| ·材料 | 第92-93页 |
| ·卵巢来源 | 第92页 |
| ·试剂仪器 | 第92-93页 |
| ·方法 | 第93-94页 |
| ·卵母细胞的采集和成熟培养 | 第93页 |
| ·卵母细胞的去核操作 | 第93页 |
| ·供体细胞的准备 | 第93页 |
| ·透明带下注射法核移植和电融合 | 第93页 |
| ·核移植胚胎的激活 | 第93页 |
| ·核移植胚胎的体外培养 | 第93-94页 |
| ·囊胚细胞团计数和凋亡染色 | 第94页 |
| ·核移植重构胚胎的程序化冷冻保存 | 第94页 |
| ·结果与分析 | 第94-100页 |
| ·EGF 对重构胚胎体外发育和冷冻的影响 | 第94-96页 |
| ·孕酮对体外培养的核移植重构胚发育和冷冻保存的影响 | 第96-97页 |
| ·VE 对核移植重构胚体外发育的影响 | 第97-98页 |
| ·海藻糖对体外培养的核移植重构胚冷冻保存的影响 | 第98-99页 |
| ·不同培养阶段的重构胚胎冷冻保存效果 | 第99-100页 |
| ·讨论 | 第100-102页 |
| ·EGF 对核移植胚胎体外发育和冷冻的影响 | 第100页 |
| ·孕酮对核移植胚胎体外发育和冷冻的影响 | 第100-101页 |
| ·VE 对核移植胚胎体外发育的影响 | 第101页 |
| ·海藻糖对核移植胚胎冷冻效果的影响 | 第101-102页 |
| ·不同发育时期的核移植胚胎胚胎冷冻效果分析 | 第102页 |
| ·结论 | 第102-103页 |
| 论文总结论 | 第103-104页 |
| 论文创新点 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-119页 |
| 缩略词 | 第119-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
| 个人简历 | 第121页 |
