中文摘要 | 第1-10页 |
英文摘要 | 第10-12页 |
1 引言 | 第12-21页 |
·水稻条纹病毒的分子生物学特性 | 第13-14页 |
·RSV 的基因组结构特点 | 第13页 |
·RSV 的转录调控和编码的蛋白 | 第13-14页 |
·RNA 干扰 | 第14-15页 |
·RNA 干扰现象的发现 | 第14-15页 |
·RNAi 的特点 | 第15页 |
·RNA 介导的病毒抗性 | 第15-17页 |
·概念的提出 | 第15-16页 |
·RNA 介导的病毒抗性的特点 | 第16-17页 |
·RNA 介导的病毒抗性本质是转录后基因沉默 | 第17页 |
·影响RNA 沉默效率的因素 | 第17-19页 |
·发夹结构 | 第17-19页 |
·不同功能基因对RNA 介导的病毒抗性的影响 | 第19-20页 |
·立题依据和主要研究内容 | 第20-21页 |
·立题依据 | 第20页 |
·主要研究内容 | 第20-21页 |
2 材料与方法 | 第21-35页 |
·材料 | 第21页 |
·毒源 | 第21页 |
·植物受体 | 第21页 |
·菌株和质粒 | 第21页 |
·常用缓冲液及培养基的配制 | 第21页 |
·常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器 | 第21页 |
·方法 | 第21-35页 |
·植物表达载体系统的构建 | 第21-27页 |
·目的片段的 PCR 扩增 | 第23页 |
·目的片段和质粒的酶切和回收 | 第23-24页 |
·目的片段和质粒的连接 | 第24页 |
·感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
·重组质粒向大肠杆菌中的转化(热激法) | 第25页 |
·转化菌落的PCR 鉴定 | 第25-26页 |
·重组质粒的酶切鉴定 | 第26页 |
·质粒DNA 的大量提取(碱裂解法) | 第26-27页 |
·重组表达载体向农杆菌中的转化(冻融法) | 第27-28页 |
·农杆菌介导的水稻基因转化 | 第28-29页 |
·水稻总DNA 的提取 | 第29-30页 |
·转基因植株的PCR 检测 | 第30页 |
·转基因植物的潮霉素抗性检测 | 第30页 |
·水稻总RNA 的提取(Trizol 法) | 第30-31页 |
·转基因水稻的抗病性分析 | 第31页 |
·转基因植株的Northern blot 分析 | 第31-33页 |
·转基因植株siRNA 的提取及杂交分析 | 第33-35页 |
3 结果与分析 | 第35-43页 |
·发夹结构植物表达载体构建 | 第35-38页 |
·400bp 目的片段与载体的连接及鉴定 | 第35-37页 |
·片段反向连接的PCR 鉴定 | 第37页 |
·重组表达载体的酶切鉴定 | 第37-38页 |
·重组表达载体向农杆菌中的转化 | 第38页 |
·转基因水稻的获得 | 第38-39页 |
·转基因水稻的鉴定 | 第39-40页 |
·转基因水稻的 HygB 抗性检测 | 第39-40页 |
·转基因水稻的PCR 检测 | 第40页 |
·转基因水稻的抗病性分析 | 第40-41页 |
·总 RNA 和siRNA 的 Northern blot 分析 | 第41-43页 |
4 讨论 | 第43-45页 |
5 结论 | 第45-46页 |
参考文献 | 第46-59页 |
附录 | 第59-68页 |
致谢 | 第68-69页 |
硕士学位论文内容简介及自评 | 第69页 |