中文摘要 | 第1-6页 |
英文摘要 | 第6-8页 |
第一部分 文献综述 | 第8-22页 |
1. 细胞信号转导 | 第8-16页 |
·信号 | 第8页 |
·植物细胞信号转导过程及胞内信使系统 | 第8-9页 |
·钙离子与胁迫信号转导 | 第9页 |
·钙靶蛋白 | 第9-16页 |
2. 盐芥作为耐盐的模式植物 | 第16-18页 |
3. 绿色荧光蛋白GFP 简介 | 第18-21页 |
·GFP 在植物体中的应用 | 第19-21页 |
4. 蛋白的原核表达及纯化 | 第21-22页 |
第二部分 实验材料及实验方法 | 第22-33页 |
1. 实验材料 | 第22-24页 |
·植物材料 | 第22页 |
·菌种 | 第22页 |
·酶、化学试剂及试剂盒 | 第22页 |
·培养基 | 第22-23页 |
·质粒提取液 | 第23页 |
·主要仪器设备 | 第23页 |
·软件 | 第23-24页 |
2.实验方法 | 第24-33页 |
·拟南芥植物材料的种植及处理 | 第24页 |
·大肠杆菌感受态的制备及转化 | 第24页 |
·质粒的提取 | 第24-25页 |
·植物基因组DNA 的提取 | 第25页 |
·RNeasy Plant Mini Kit 提取植物总RNA 及DNA 酶消化 | 第25-26页 |
·RNA 的定量与检测 | 第26-27页 |
·RNA 的反转录及cDNA 模板的稀释 | 第27页 |
·农杆菌感受态的制备及转化 | 第27-28页 |
·花序侵染法转化拟南芥 | 第28页 |
·转化子的筛选及遗传分析 | 第28-29页 |
·Northern 杂交分析 | 第29-31页 |
·融合蛋白的表达以及纯化 | 第31-32页 |
·植物细胞膜透性的测定 | 第32-33页 |
·植物细胞液渗透势的测定 | 第33页 |
第三部分 实验结果与分析 | 第33-43页 |
1. 表达载体的构建及验证 | 第33-36页 |
·CDPK9 过量表达载体的构建及验证 | 第33-34页 |
·CDPK9-GST 表达载体的构建及验证 | 第34-35页 |
·CDPK9-GFP 表达载体的构建及验证 | 第35页 |
·CDPK9-GFP 表达载体的PCR 验证 | 第35-36页 |
2. 对转基因和野生型植株DNA 的PCR 鉴定 | 第36页 |
3. 对转基因和野生型植株RT-PCR 鉴定 | 第36-37页 |
4.CDPK9-GST 融合蛋白的表达 | 第37页 |
5. CDPK9-GFP 转基因抗性苗已筛出,但还未得到满意的定位图片 | 第37页 |
6. 对转基因和野生型植株耐逆性鉴定 | 第37-38页 |
·对转基因和野生型植株电导率的测定 | 第37-38页 |
·对转基因和野生型植株在盐处理条件下渗透势的测定 | 第38页 |
7. 转基因和野生型拟南芥在种子萌发阶段抗逆性的测定 | 第38-41页 |
·在无任何胁迫处理条件下的转基因和野生型株系萌发率的测定 | 第38-39页 |
·在0.5umol/LABA 处理条件下的转基因和野生型株系萌发率的测定 | 第39-40页 |
·在1umol/L ABA 上野生型和转基因株系的萌发率测定 | 第40页 |
·200mmol/L 甘露醇处理条件下的转基因和野生型株系的萌发率 | 第40-41页 |
·400mmol/L 甘露醇处理条件下的转基因和野生型株系的萌发率 | 第41页 |
8. 分析与讨论 | 第41-43页 |
参考文献 | 第43-49页 |
致谢 | 第49-50页 |
已发文章 | 第50页 |