| 致谢 | 第1-10页 |
| 缩略表 | 第10-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 文献综述 | 第15-27页 |
| 引言 | 第15页 |
| 1.植物中磷信号传导及调控机制的研究 | 第15-21页 |
| ·拟南芥中以PHR1为中心的磷信号调控体系 | 第15-17页 |
| ·microRNA对磷信号的调控 | 第17-19页 |
| ·类泛素化修饰对磷信号的翻译后调控 | 第19-21页 |
| 2.磷素分布转运与调控因子的研究 | 第21-27页 |
| ·pho1 | 第21-22页 |
| ·pho2 | 第22-24页 |
| ·pho3 | 第24-25页 |
| ·at4 | 第25-27页 |
| 第二章 水稻低磷胁迫相关转录因子OsPHR1和OsPHR2基因的同源克隆及生物信息学分析 | 第27-33页 |
| 1.方法 | 第27-28页 |
| ·OsPHR1和OsPHR2基因的序列分析与同源克隆 | 第27页 |
| ·OsPHR1和OsPHR2与MYB-CC家族基因的联配比较 | 第27页 |
| ·OsPHR1和OsPHR2与MYB-CC家族基因的系统进化分析 | 第27-28页 |
| 2.结果与分析 | 第28-32页 |
| ·OsPHR1和OsPHR2的基因结构和蛋白结构分析 | 第28-31页 |
| ·OsPHR1和OsPHR2与MYB-CC家族蛋白联配及进化树分析 | 第31-32页 |
| 3.小结与讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 OsPHR1和OsPHR2基因的表达分析 | 第33-48页 |
| 1.OsPHR1和OsPHR2基因的组织特异性表达分析 | 第33-36页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-35页 |
| ·样品的准备 | 第33-34页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第34页 |
| ·逆转录及半定量RT-PCR | 第34-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-36页 |
| ·OsPHR1和OsPHR2基因的表达部位 | 第35-36页 |
| ·OsPHR1和OsPHR2基因对磷饥饿的响应 | 第36页 |
| 2.OsPHR1和OsPHR2蛋白的亚细胞定位分析 | 第36-41页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·方法 | 第37-40页 |
| ·GFP融合表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·样品的预处理 | 第38页 |
| ·微弹的制备 | 第38-39页 |
| ·质粒的包裹 | 第39页 |
| ·PDS-1000/He型基因枪的操作步骤 | 第39-40页 |
| ·轰击后样品的处理 | 第40页 |
| ·GFP荧光的观察 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-41页 |
| 3.OsPHR1和OsPHR2蛋白的自激活活性分析 | 第41-47页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-44页 |
| ·酵母融合表达载体的构建 | 第41-43页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第43页 |
| ·酵母的转化 | 第43页 |
| ·α-galactosidase活性测定 | 第43-44页 |
| ·结果与分析 | 第44-47页 |
| 4.小结与讨论 | 第47-48页 |
| 第四章 OsPHR1和OsPHR2的转基因及表型分析 | 第48-89页 |
| 1.OsPHR1和OsPHR2超表达及RNAi干涉转基因水稻的构建 | 第48-57页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-55页 |
| ·OsPHR1和OsPHR2基因增强载体的构建 | 第48-49页 |
| ·OsPHR1和OsPHR2基因RNAi干涉载体的构建 | 第49页 |
| ·农杆菌介导的水稻转化 | 第49-52页 |
| ·T0代转基因水稻的半定量RT-PCR检测 | 第52页 |
| ·转基因水稻的Southern Blot检测 | 第52-55页 |
| ·结果与分析 | 第55-57页 |
| ·OsPHR1和OsPHR2转基因株系增强表达和RNAi的鉴定 | 第55-56页 |
| ·OsPHR1和OsPHR2转基因株系Southern鉴定 | 第56-57页 |
| 2.OsPHR2转基因增强及干涉株系的表型分析 | 第57-86页 |
| ·材料 | 第57页 |
| ·方法 | 第57-66页 |
| ·T1代OsPHR2增强株系表型分离的协同验证 | 第57-59页 |
| ·OsPHR2增强及干涉株系T2代纯合体的筛选 | 第59-60页 |
| ·T2代纯合株系的半定量RT-PCR检测 | 第60页 |
| ·OsPHR2-Ov-1的磷梯度水培实验 | 第60页 |
| ·OsPHR2增强及干涉株系缺磷10天的表型观察及参数统计 | 第60-61页 |
| ·OsPHR2增强及干涉株系低磷35天的表型观察及磷含量的测定 | 第61-63页 |
| ·OsPHR2-Ov-1的磷梯度土培实验及生育期表型观察 | 第63-66页 |
| ·结果与分析 | 第66-86页 |
| ·OsPHR2的增强表达引起植物地上部有效磷的大量积累 | 第66-71页 |
| ·低磷能恢复OsPHR2增强株系的生长 | 第71-79页 |
| ·OsPHR2的增强表达提高了植物根系对缺磷信号的响应 | 第79-83页 |
| ·OsPHR2的干涉对植物生长无明显影响 | 第83-86页 |
| 3.OsPHR1转基因增强及干涉株系的表型分析 | 第86-88页 |
| ·材料 | 第86页 |
| ·方法 | 第86页 |
| ·T1代OsPHR1增强及干涉株系正常及缺磷10天的表型观察 | 第86页 |
| ·结果与分析 | 第86-88页 |
| 4.小结与讨论 | 第88-89页 |
| 第五章 OsPHR2基因对下游基因表达的调控 | 第89-100页 |
| 1 磷饥饿响应基因在OsPHR2增强及RNAi干涉株系中的表达 | 第89-92页 |
| ·材料 | 第89页 |
| ·方法 | 第89-90页 |
| ·转基因材料的缺磷处理 | 第89页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第89页 |
| ·逆转录及半定量RT-PCR分析 | 第89-90页 |
| ·结果与分析 | 第90-92页 |
| ·OsPHR2的增强表达模拟了磷饥饿信号 | 第90-91页 |
| ·OsPHR2的干涉抑制了OsIPS1和OsIPS2的诱导表达 | 第91-92页 |
| 2 高亲和磷酸转运体OsPTs在OsPHR2增强株系中的表达 | 第92-95页 |
| ·材料 | 第92-93页 |
| ·方法 | 第93-94页 |
| ·转基因材料的缺磷处理 | 第93页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第93页 |
| ·实时定量RT-PCR分析(水解探针UPL) | 第93-94页 |
| ·结果与分析 | 第94-95页 |
| 3 OsPHO2及MicroRNA(miR399)在OsPHR2增强株系中的表达 | 第95-97页 |
| ·材料 | 第95页 |
| ·方法 | 第95-96页 |
| ·转基因材料的缺磷处理 | 第95页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第95页 |
| ·实时定量RT-PCR分析(SYBR Green1) | 第95-96页 |
| ·结果与分析 | 第96-97页 |
| 4 小结与讨论 | 第97-100页 |
| 第六章 结论与展望 | 第100-102页 |
| 1.结论 | 第100-101页 |
| 2.展望 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-108页 |
| 攻读博士学位期间发表的科研论文 | 第108页 |
