| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 引言 | 第11-17页 |
| 1 植物抗病基因同源序列研究进展 | 第11-12页 |
| 2 cDNA-AFLP 技术及其应用 | 第12-13页 |
| 3 cDNA 末端快速扩增技术 | 第13-14页 |
| 4 病毒介导的基因沉默 | 第14-15页 |
| 5 本论文主要研究内容及研究意义 | 第15-16页 |
| 6 研究技术路线 | 第16-17页 |
| 第一章小麦抗病基因同源序列的分离及其功能分析 | 第17-53页 |
| 1 材料与方法 | 第17-31页 |
| ·试验材料 | 第17-18页 |
| ·材料 | 第17页 |
| ·供试菌株与质粒 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17-18页 |
| ·主要仪器设备 | 第18页 |
| ·试验方法 | 第18-31页 |
| ·小麦抗病基因同源序列的分离 | 第18-22页 |
| ·TcL124 小麦抗病同源基因RGA1 全长cDNA 的获得 | 第22-25页 |
| ·小麦中RGA1 基因的表达分析 | 第25-26页 |
| ·TcL124 DNA 中RGA1 基因克隆 | 第26页 |
| ·Southern 杂交 | 第26-28页 |
| ·利用病毒诱导的基因沉默验证RGA1 基因的功能 | 第28-31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-50页 |
| ·反应型鉴定 | 第31-32页 |
| ·总RNA 的提取 | 第32页 |
| ·TcL124 小麦抗病基因同源片段RGA1 的扩增 | 第32-35页 |
| ·TcL124 小麦抗病基因同源片段RGA1 的序列分析 | 第33页 |
| ·RGA1 在基因数据库中的同源性检索 | 第33-34页 |
| ·小麦抗病基因同源片段RGA1 的聚类分析 | 第34-35页 |
| ·小麦抗病同源基因RGA1 全长CDNA 的获得 | 第35-43页 |
| ·5′RACE 的扩增结果 | 第35-36页 |
| ·3′RACE 的扩增结果 | 第36页 |
| ·5′RACE 和3′RACE 与靶序列RGA1 片段的拼接 | 第36-39页 |
| ·RGA1 基因编码蛋白质产物的结构分析及功能预测 | 第39-43页 |
| ·TcL124 小麦RGA1 基因荧光实时定量PCR 表达分析 | 第43页 |
| ·Southern 杂交 | 第43页 |
| ·小麦基因组中全长基因的克隆 | 第43-44页 |
| ·VIGS 结果与分析 | 第44-50页 |
| ·VIGS 载体系统中γ-PDS 载体的优化 | 第44-45页 |
| ·候选基因的VIGS 载体构建 | 第45-46页 |
| ·载体线性化 | 第46页 |
| ·体外转录 | 第46-47页 |
| ·目的基因沉默效率的检测 | 第47-48页 |
| ·接种叶锈菌后的表型观察 | 第48页 |
| ·接种叶锈菌后的组织学观察 | 第48-50页 |
| 3 讨论 | 第50-53页 |
| 第二章 TcL124 与叶锈菌互作的cDNA-AFLP 分析及激酶基因的克隆与功能分析 | 第53-98页 |
| 1 材料与方法 | 第53-64页 |
| ·供试材料 | 第53页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第53-54页 |
| ·仪器 | 第53页 |
| ·试剂 | 第53-54页 |
| ·实验方法 | 第54-64页 |
| ·cDNA-AFLP 分析 | 第54-60页 |
| ·差异表达基因的荧光实时定量PCR 分析 | 第60-61页 |
| ·TaSTK、TaRLPK 、TaLRRK 基因全长cDNA 的获得 | 第61-62页 |
| ·利用病毒诱导的基因沉默验证TaSTK、TaRLPK、TaLRRK 基因的功能 | 第62-64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-93页 |
| ·cDNA-AFLP 分析 | 第64-72页 |
| ·小麦总RNA 的提取 | 第64页 |
| ·双链cDNA 的合成 | 第64-65页 |
| ·预扩增结果 | 第65页 |
| ·选择扩增结果 | 第65-66页 |
| ·TcL124 的cDNA-AFLP 分析 | 第66-68页 |
| ·回收片段的再扩增 | 第68页 |
| ·差异片段的克隆、序列测序与生物信息学分析 | 第68-72页 |
| ·差异片段的荧光实时定量PCR 分析 | 第72-74页 |
| ·TaSTK、TaRLPK、TaLRRK 基因的克隆 | 第74-87页 |
| ·5′RACE PCR 扩增 | 第74页 |
| ·3′RACE PCR 扩增 | 第74-75页 |
| ·全长cDNA 的获得 | 第75-78页 |
| ·TaSTK、TaLRRK、TaRLPK 基因的生物信息学分析 | 第78-87页 |
| ·利用VIGS 技术分析TaSTK、TaRLPK、TaLRRK 基因的功能 | 第87-93页 |
| ·重组γ载体的构建 | 第87-88页 |
| ·VIGS 载体的线性化 | 第88页 |
| ·体外转录反应 | 第88-89页 |
| ·目的基因沉默效率的检测 | 第89-90页 |
| ·接种叶锈菌后的表型观察 | 第90页 |
| ·接种叶锈菌后组织学观察 | 第90-93页 |
| 3 讨论 | 第93-98页 |
| 全文结论 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-110页 |
| 附录 | 第110-116页 |
| 附录A 小麦叶锈病侵染型 | 第110-111页 |
| 附录B 试验所用试剂 | 第111-113页 |
| 附录C | 第113-115页 |
| 附录D | 第115-116页 |
| 在读期间发表论文 | 第116页 |
| 作者简历 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
