| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第1章 引言 | 第13-26页 |
| ·围食膜的分类、形成及组分 | 第13-16页 |
| ·围食膜的种类 | 第13-14页 |
| ·围食膜的形成机制 | 第14页 |
| ·围食膜的组分 | 第14-16页 |
| ·围食膜的结构及功能 | 第16-19页 |
| ·围食膜的结构模型 | 第16-18页 |
| ·围食膜的功能 | 第18-19页 |
| ·围食膜内潜在的害虫防治靶标位点 | 第19-21页 |
| ·昆虫杆状病毒表达系统 | 第21-24页 |
| ·昆虫杆状病毒表达系统的特点 | 第21-22页 |
| ·昆虫杆状病毒表达系统的应用 | 第22-23页 |
| ·影响杆状病毒表达系统表达外源蛋白的因素 | 第23页 |
| ·Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统 | 第23-24页 |
| ·选题依据及目的意义 | 第24-26页 |
| 第2章 华北大黑鳃金龟幼虫中肠cDNA 表达文库的构建 | 第26-40页 |
| ·材料 | 第26-28页 |
| ·供试昆虫 | 第26页 |
| ·供试菌株及试剂盒 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·试剂及溶液 | 第27-28页 |
| ·仪器设备 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-34页 |
| ·华北大黑鳃金龟中肠组织的收集 | 第28页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第28-29页 |
| ·mRNA 分离纯化 | 第29页 |
| ·cDNA 的合成 | 第29-31页 |
| ·cDNA 的分级、纯化及定量 | 第31-32页 |
| ·cDNA 与载体λZAP 的连接与包装 | 第32-33页 |
| ·cDNA 文库重组率、库容量检测 | 第33页 |
| ·cDNA 文库的扩增 | 第33页 |
| ·cDNA 文库质量鉴定 | 第33-34页 |
| ·结果与分析 | 第34-37页 |
| ·总RNA 的提取 | 第34-35页 |
| ·mRNA 的分离纯化 | 第35页 |
| ·cDNA 第一链和第二链的合成 | 第35-36页 |
| ·cDNA 分级分离及定量 | 第36-37页 |
| ·cDNA 文库的滴度及重组率检测 | 第37页 |
| ·cDNA 文库插入片断大小的PCR 鉴定 | 第37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| ·cDNA 文库的构建方法 | 第37-38页 |
| ·影响cDNA 文库构建质量的因素 | 第38页 |
| ·cDNA 文库的应用 | 第38-39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 第3章 华北大黑鳃金龟cDNA 表达文库的免疫筛选 | 第40-47页 |
| ·材料 | 第40-41页 |
| ·文库、抗体及宿主菌 | 第40页 |
| ·主要工具酶及试剂 | 第40页 |
| ·主要仪器设备 | 第40-41页 |
| ·方法 | 第41-42页 |
| ·XL1-Blue 大肠杆菌感受态的制备 | 第41页 |
| ·cDNA 文库单克隆的制备 | 第41页 |
| ·转膜 | 第41页 |
| ·免疫和显色反应 | 第41页 |
| ·阳性克隆的第二轮筛选 | 第41-42页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第42页 |
| ·cDNA 的序列分析 | 第42页 |
| ·结果与分析 | 第42-45页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第42页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第42-44页 |
| ·阳性克隆基因的序列分析 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| ·cDNA 文库的免疫筛选 | 第45页 |
| ·影响免疫筛选的因素 | 第45-46页 |
| ·小结 | 第46-47页 |
| 第4章 华北大黑鳃金龟围食膜几丁质结合蛋白 HoCBP2 及HoCBP76 的克隆、表达及功能分析 | 第47-68页 |
| ·材料与方法 | 第47-54页 |
| ·菌株、细胞及载体 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·CBP 基因的克隆与测序分析 | 第47-48页 |
| ·CBP 基因的原核表达 | 第48-50页 |
| ·CBP 基因的真核表达 | 第50-53页 |
| ·CBP 蛋白功能检测 | 第53-54页 |
| ·CBP 蛋白在H.oblita 幼虫组织中的免疫定位 | 第54页 |
| ·结果与分析 | 第54-65页 |
| ·HoCBP2 及HoCBP76 的序列分析 | 第54-60页 |
| ·HoCBP2 及HoCBP76 的原核表达 | 第60-62页 |
| ·HoCBP2 和HoCBP76 在Bac-to-Bac 系统中的表达 | 第62-64页 |
| ·HoCBP2 和HoCBP76 重组蛋白的几丁质活性检测 | 第64-65页 |
| ·CBP 蛋白在H.oblita 幼虫组织中的免疫定位 | 第65页 |
| ·讨论 | 第65-66页 |
| ·小结 | 第66-68页 |
| 第5章 华北大黑鳃金龟几丁质酶HoChi 的分离鉴定 | 第68-80页 |
| ·材料与方法 | 第68-71页 |
| ·菌株、细胞及载体 | 第68页 |
| ·主要试剂及工具酶 | 第68-69页 |
| ·几丁质酶HoChi 基因的鉴定与测序分析 | 第69页 |
| ·几丁质酶HoChi 基因的原核表达 | 第69-70页 |
| ·几丁质酶HoChi 基因的真核表达 | 第70-71页 |
| ·重组杆状病毒DNA 的提取及PCR 鉴定 | 第71页 |
| ·结果与分析 | 第71-78页 |
| ·HoChi 基因的序列分析 | 第71-73页 |
| ·华北大黑鳃金龟HoChi 与几种其他昆虫几丁质酶氨基酸序列的比较分析 | 第73-75页 |
| ·华北大黑鳃金龟HoChi 重组载体的构建和表达 | 第75页 |
| ·几丁质酶HoChi 基因的真核表达 | 第75-78页 |
| ·讨论 | 第78-79页 |
| ·HoChi 基因属于典型的昆虫18 家族Ⅰ亚族几丁质酶 | 第78页 |
| ·HoChi 基因序列保守性分析 | 第78-79页 |
| ·华北大黑鳃金龟幼虫中肠HoChi 基因的应用前景 | 第79页 |
| ·小结 | 第79-80页 |
| 第6章 华北大黑鳃金龟丝氨酸羧肽酶HoSCP 的分离鉴定 | 第80-88页 |
| ·材料与方法 | 第80-81页 |
| ·材料 | 第80页 |
| ·H.oblita 中肠cDNA 文库的筛选及序列分析 | 第80页 |
| ·HoSCP 基因的原核表达 | 第80-81页 |
| ·HoSCP 基因的真核表达 | 第81页 |
| ·结果与分析 | 第81-87页 |
| ·HoSCP 基因序列分析 | 第81-84页 |
| ·丝氨酸羧肽酶的原核表达 | 第84页 |
| ·丝氨酸羧肽酶的真核表达 | 第84-87页 |
| ·讨论 | 第87页 |
| ·小结 | 第87-88页 |
| 第7章 华北大黑鳃金龟围食膜肠粘蛋白HoIIM 的分离鉴定 | 第88-96页 |
| ·材料与方法 | 第88-90页 |
| ·供试昆虫及试剂 | 第88页 |
| ·H.oblita 幼虫围食膜的提取 | 第88页 |
| ·PAS 染色所需试剂的配制 | 第88-89页 |
| ·H.oblita 幼虫围食膜蛋白组分分析 | 第89页 |
| ·病毒增效蛋白Enhancin 对H.oblita 幼虫围食膜的影响 | 第89页 |
| ·H.oblita 中肠cDNA 表达文库的筛选及HoIIM 的测序分析 | 第89-90页 |
| ·结果与分析 | 第90-93页 |
| ·H.oblita 幼虫围食膜蛋白组分分析 | 第90页 |
| ·Enhancin 对H.oblita 幼虫围食膜的影响 | 第90页 |
| ·HoIIM 基因的序列分析 | 第90-93页 |
| ·讨论 | 第93-95页 |
| ·颗粒体病毒增效蛋白对昆虫围食膜的影响 | 第93-94页 |
| ·IIM 的结构特征 | 第94-95页 |
| ·小结 | 第95-96页 |
| 全文结论 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-109页 |
| 附录 | 第109-111页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第111-112页 |
| 作者简历 | 第112-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
