| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 缩略语 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1 生物膜与膜蛋白的概述 | 第11-13页 |
| 2 膜蛋白的研究进展 | 第13-14页 |
| 3 杆状病毒 | 第14-15页 |
| 4 家蚕杆状病毒表达载体系统(BmNPV) | 第15-16页 |
| 5 多角体蛋白的概述及研究进展 | 第16-17页 |
| 6 展望 | 第17-19页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第19-21页 |
| 1 研究目的和意义 | 第19页 |
| 2 研究内容 | 第19-20页 |
| 3 实验流程图 | 第20-21页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第21-26页 |
| 1 序列与工具 | 第21页 |
| ·序列 | 第21页 |
| ·生物信息学工具 | 第21页 |
| 2 方法 | 第21-22页 |
| 3 结果 | 第22-25页 |
| ·cDNA 的选取 | 第22页 |
| ·基因序列及命名 | 第22页 |
| ·疏水性分析 | 第22-23页 |
| ·信号肽分析 | 第23-24页 |
| ·跨膜区分析 | 第24页 |
| ·二级结构预测 | 第24页 |
| ·BmMP54 蛋白定位的预测 | 第24-25页 |
| ·BmMP54 蛋白的空间构象 | 第25页 |
| 4 讨论 | 第25-26页 |
| 第四章 家蚕Polh-BmMP54 融合基因的克隆与原核表达 | 第26-47页 |
| 1 材料与试剂 | 第26-30页 |
| ·材料 | 第26页 |
| ·试剂 | 第26页 |
| ·试剂的配制 | 第26-30页 |
| 2 方法 | 第30-40页 |
| ·克隆实验设计 | 第30-31页 |
| ·克隆Polh 基因 | 第31页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第31-32页 |
| ·PCR 产物与表达载体pGEX-4T-1 的双酶切 | 第32页 |
| ·酶切产物处理及回收 | 第32页 |
| ·连接反应 | 第32页 |
| ·E.coli TG1 和E.coli BL 21(DE3)感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| ·连接产物的转化 | 第33页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第33页 |
| ·BmMP54 基因的克隆 | 第33-35页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第35页 |
| ·双酶切BmMP54 的PCR 片段与重组表达载体pGEX-4T-1-Polh 并回收 | 第35-36页 |
| ·连接反应 | 第36页 |
| ·E. coli TG1、BL21 (DE3)感受态细胞的制备（CaCl_2 法） | 第36页 |
| ·连接产物的转化 | 第36页 |
| ·重组pGEX-4T-1-Polh-BmMP54 质粒的筛选与鉴定 | 第36-37页 |
| ·序列测定 | 第37页 |
| ·重组质粒的转化及鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中表达 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第38页 |
| ·抗体特异性的Western blotting 鉴定 | 第38-39页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| 3 结果 | 第40-45页 |
| ·Polh 基因的PCR 扩增 | 第40-41页 |
| ·BmMP54 基因的PCR 扩增 | 第41页 |
| ·重组质粒pGEX-4T-1-polh-BmMP54 的 PCR 及酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·序列测定 | 第42页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第42-43页 |
| ·Western blotting 鉴定 | 第43页 |
| ·调节pH 纯化 Polh-BmMP54 融合蛋白 | 第43-44页 |
| ·阴离子交换层析进一步纯化融合蛋白并作Western blotting 检测 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 第五章 家蚕BmMP54 基因融合Polh 基因在家蚕杆状病毒表达系统中的表达 | 第47-58页 |
| 1 材料与试剂 | 第47-49页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·试剂配制 | 第47-49页 |
| 2 方法 | 第49-54页 |
| ·细胞培养与冻存、复苏 | 第49-50页 |
| ·家蚕细胞Bm N 贴壁培养 | 第50页 |
| ·重组质粒pFastBacTMHTb-Polh 的构建 | 第50-51页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第51页 |
| ·重组病毒基因组Bacmid- Polh -BmMP54 的构建与鉴定 | 第51-54页 |
| ·重组病毒基因组通过脂质体介导法转染家蚕BmN 细胞 | 第54页 |
| ·重组病毒的提取及PCR 鉴定 | 第54页 |
| ·Western blotting 鉴定融合蛋白在家蚕细胞中的表达 | 第54页 |
| 3 结果 | 第54-56页 |
| ·重组质粒pFastBacTMHTb-Polh-BmMP54 的PCR 及酶切鉴定 | 第54-55页 |
| ·重组Bacmid 基因组的PCR 鉴定 | 第55-56页 |
| ·家蚕细胞中融合蛋白表达的Western blotting 鉴定 | 第56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 第六章 荧光定量PCR | 第58-63页 |
| 1 材料与试剂 | 第58页 |
| ·提取各时期及组织样品 | 第58页 |
| ·试剂 | 第58页 |
| 2 方法 | 第58-60页 |
| ·引物设计 | 第58页 |
| ·提取总RNA | 第58-59页 |
| ·RNA 反转录 | 第59页 |
| ·反应程序 | 第59页 |
| ·荧光定量PCR 数据分析 | 第59-60页 |
| 3 结果 | 第60-61页 |
| ·五龄幼虫各组织中mRNA 量的变化 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 第七章 BmMP54 基因的RNAi 对家蚕培养细胞生物活性的影响 | 第63-72页 |
| 1 材料与试剂 | 第63-64页 |
| ·材料 | 第63页 |
| ·试剂 | 第63页 |
| ·试剂的配制 | 第63-64页 |
| 2 方法 | 第64-67页 |
| ·dsRNA 的合成 | 第64-65页 |
| ·RNAi--dsRNA 的转染 | 第65-66页 |
| ·MTT 检测细胞变化情况 | 第66页 |
| ·流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第66-67页 |
| 3 结果 | 第67-70页 |
| ·dsRNA 的合成 | 第67-68页 |
| ·BmMP54 RNAi 的MTT 检测结果分析 | 第68页 |
| ·流式细胞仪检测BmMP54 RNAi 对BmN 细胞凋亡的影响 | 第68-70页 |
| 4 讨论 | 第70-72页 |
| 结论与创新点 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
