| 引言 | 第1-10页 |
| 实验一 乙醇脱氢酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第10-29页 |
| 材料与方法 | 第10-20页 |
| 1 材料 | 第10页 |
| ·载体和质粒 | 第10页 |
| ·酶与试剂 | 第10页 |
| 2 方法 | 第10-20页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第10-14页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第14-15页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第15-20页 |
| 结果与分析 | 第20-24页 |
| 1 pET-28a-adhB 的重组原核表达质粒的鉴定 | 第20-21页 |
| ·重组表达质粒的酶切鉴定结果 | 第20页 |
| ·重组表达质粒的PCR 鉴定结果 | 第20-21页 |
| ·重组表达质粒的测序结果 | 第21页 |
| 2 表达产物的分析 | 第21-24页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 检测结果及优化表达 | 第21-23页 |
| ·乙醇脱氢酶的定性检测 | 第23-24页 |
| 讨论 | 第24-28页 |
| ADH 的作用 | 第24页 |
| DNA 重组技术 | 第24-25页 |
| 原核表达系统的选择 | 第25-26页 |
| 表达条件的优化 | 第26页 |
| 乙醛指示平板的定性实验 | 第26-28页 |
| 结论 | 第28-29页 |
| 实验二 自杀载体PMDLAT 的构建 | 第29-46页 |
| 材料和方法 | 第29-37页 |
| 1 主要材料 | 第29-30页 |
| ·菌株和质粒 | 第29页 |
| ·酶和试剂 | 第29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29-30页 |
| ·培养基 | 第30页 |
| 2 主要方法 | 第30-37页 |
| ·获取目的基因 | 第30-31页 |
| ·构建重组质粒 | 第31-33页 |
| ·构建自杀载体pMDLAT | 第33-37页 |
| 结果与分析 | 第37-40页 |
| ·tet 目的基因的PCR 扩增结果 | 第37页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定结果 | 第37-38页 |
| ·自杀载体的酶切鉴定结果 | 第38页 |
| ·自杀载体的PCR 鉴定结果 | 第38-39页 |
| ·自杀载体的测序结果 | 第39-40页 |
| 讨论 | 第40-45页 |
| 自杀载体的构建思路 | 第40-41页 |
| 酶切位点的设计 | 第41-42页 |
| 同源重组方法和变链素的作用 | 第42-45页 |
| 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 附录一:英文缩写词表 | 第49-50页 |
| 附录二:pGEM-T 载体图谱 | 第50-51页 |
| 附录三:pET-28a 载体图谱 | 第51页 |
| 附录四:pMD18-T 载体图谱 | 第51-52页 |
| 附录五:adhB 基因测序结果 | 第52-54页 |
| 附录六:tet 基因测序结果 | 第54-56页 |
| 附录七:综述 | 第56-61页 |
| 中文摘要 | 第61-64页 |
| Abstract | 第64-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 导师及作者简介 | 第68-69页 |