| 论文课题来源 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 论文创新点 | 第15-16页 |
| 研究内容 | 第16-115页 |
| 第一章 鸭白介素2基因克隆与生物信息学分析 | 第16-30页 |
| 1 材料 | 第17页 |
| 2 方法 | 第17-18页 |
| ·鸭白介素2基因组克隆 | 第17-18页 |
| ·鸭白介素2生物信息学分析 | 第18页 |
| 3 结果 | 第18-28页 |
| ·duIL-2全基因DNA片段扩增和序列测定 | 第18-19页 |
| ·duIL-2基因结构 | 第19页 |
| ·duIL-2基因的启动子调节位点 | 第19-20页 |
| ·鸭和其他动物IL-2氨基酸同源性分析 | 第20页 |
| ·duIL-2成熟蛋白进化树分析 | 第20-22页 |
| ·IL-2蛋白的三维结构预测 | 第22-28页 |
| 4 讨论 | 第28-30页 |
| 第二章 不同原核系统对重组鸭白介素2的表达 | 第30-48页 |
| 1 材料 | 第31页 |
| 2 方法 | 第31-37页 |
| ·脾淋巴细胞的诱导培养及总RNA的抽提 | 第31页 |
| ·RT-PCR | 第31-32页 |
| ·鸭IL-2 cDNA克隆及鉴定 | 第32页 |
| ·重组载体构建及鉴定 | 第32-33页 |
| ·rduIL-2的诱导表达 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE与Western blot鉴定 | 第33-34页 |
| ·变性纯化 | 第34页 |
| ·天然纯化 | 第34-35页 |
| ·FPLC纯化单体 | 第35页 |
| ·rduIL-2复性 | 第35-36页 |
| ·天然电泳分析 | 第36页 |
| ·PF-2D分析 | 第36-37页 |
| 3 结果 | 第37-46页 |
| ·RT-PCR产物的克隆及鉴定 | 第37页 |
| ·重组表达质粒的构建与鉴定 | 第37-39页 |
| ·SDS-PAGE鉴定 | 第39-40页 |
| ·Western blot鉴定 | 第40页 |
| ·rduIL-2产物的纯化 | 第40-41页 |
| ·可溶性rduIL-2单体的分离 | 第41-42页 |
| ·rduIL-2复性 | 第42页 |
| ·等电点与异构体分析 | 第42-46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 抗重组鸭IL-2抗体的制备与鉴定 | 第48-61页 |
| 1 材料 | 第49-50页 |
| ·实验动物、生化试剂及培养基 | 第49页 |
| ·抗原和抗体 | 第49-50页 |
| 2 方法 | 第50-54页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第50-51页 |
| ·duIL-2多抗血清的制备 | 第51页 |
| ·抗原捕获ELISA | 第51-52页 |
| ·识别真核表位抗体鉴定 | 第52-53页 |
| ·抗体抑制实验 | 第53-54页 |
| 3 结果 | 第54-59页 |
| ·单克隆抗体制备 | 第54-55页 |
| ·单克隆抗体亚类及腹水效价检测 | 第55页 |
| ·抗duIL-2多克隆抗体效价测定 | 第55页 |
| ·抗原捕获ELISA | 第55-56页 |
| ·抗duIL-2单克隆和多克隆抗体功能鉴定 | 第56-59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| 第四章 鸭白介素2生物学活性与毒副作用 | 第61-74页 |
| 1 材料 | 第62-63页 |
| 2 方法 | 第63-66页 |
| ·IL-2的制备 | 第63页 |
| ·DuIL-2 DNA质粒大量制备、鉴定和浓度测定 | 第63-64页 |
| ·体外生物学活性 | 第64页 |
| ·体内生物学活性 | 第64页 |
| ·体内毒性研究 | 第64-65页 |
| ·rduIL-2,duIL-2 DNA载体对AIV油乳剂灭活苗免疫效力的影响 | 第65-66页 |
| 3 结果 | 第66-70页 |
| ·rduIL-2蛋白的体外生物学活性 | 第66-67页 |
| ·rduIL-2蛋白的体内生物学活性 | 第67-68页 |
| ·体内副作用 | 第68-69页 |
| ·rduIL-2蛋白,duIL-2 DNA载体的疫苗佐剂效应 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70-74页 |
| 第五章 duIL-2Rα cDNA克隆与生物信息学分析 | 第74-87页 |
| 1 材料 | 第75-76页 |
| ·实验动物 | 第75页 |
| ·菌种及质粒 | 第75页 |
| ·工具酶及试剂 | 第75-76页 |
| 2 方法 | 第76-79页 |
| ·引物设计 | 第76-77页 |
| ·鸭脾细胞分离与培养 | 第77页 |
| ·脾细胞总RNA的抽提 | 第77页 |
| ·含通用标签的总cDNA第一链合成 | 第77-78页 |
| ·引物探针梯度PCR(3'-RACE) | 第78页 |
| ·特异性小标签鉴定 | 第78页 |
| ·序列测定拼接及生物信息学分析 | 第78-79页 |
| 3 结果 | 第79-85页 |
| ·RT-PCR | 第79-81页 |
| ·测序结果 | 第81页 |
| ·信号肽,成熟蛋白跨膜区,糖基化位点分析 | 第81-83页 |
| ·鸭和其他动物IL-2Rα cDNA编码的氨基酸同源性及进化树分析 | 第83-85页 |
| 4 讨论 | 第85-87页 |
| 第六章 重组鸭IL-2Rα原核表达与鉴定 | 第87-95页 |
| 1 材料 | 第87-88页 |
| ·质粒、菌株和生化试剂 | 第87-88页 |
| ·单克隆抗体和酶标抗体 | 第88页 |
| ·常用缓冲液和培养基配制 | 第88页 |
| 2 方法 | 第88-90页 |
| ·重组表达质粒的构建及序列测定 | 第88页 |
| ·重组鸭IL-2Rα在pET32a表达系统中的表达与鉴定 | 第88-90页 |
| 3 结果 | 第90-92页 |
| ·重组表达质粒pET32a-duIL2Rα的鉴定 | 第90-91页 |
| ·最佳诱导时间的确定 | 第91页 |
| ·Western blot鉴定 | 第91-92页 |
| ·duIL-2Rα的纯化 | 第92页 |
| 4 讨论 | 第92-95页 |
| 第七章 抗重组鸭IL-2Rα抗体的制备与鉴定 | 第95-110页 |
| 1 材料 | 第96页 |
| ·实验动物、生化试剂及培养基 | 第96页 |
| ·抗原和抗体 | 第96页 |
| ·菌株、质粒、细胞系 | 第96页 |
| 2 方法 | 第96-101页 |
| ·动物免疫 | 第96页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立、筛选及克隆化 | 第96-97页 |
| ·Western blot | 第97页 |
| ·单克隆抗体Ig类别、亚类测定 | 第97页 |
| ·多抗血清的制备 | 第97页 |
| ·识别真核表达rduIL-2Rα蛋白的抗体筛选 | 第97-99页 |
| ·腹水的制备及效价测定 | 第99页 |
| ·识别内源性duIL-2Rα蛋白的抗体筛选 | 第99-100页 |
| ·CD25~+细胞流式分析法建立 | 第100页 |
| ·抗体抑制实验 | 第100-101页 |
| 3 结果 | 第101-107页 |
| ·细胞株的筛选及克隆化 | 第101页 |
| ·ELISA检测结果 | 第101页 |
| ·Western blot检测及亚类鉴定 | 第101-102页 |
| ·腹水制备及其效价 | 第102-103页 |
| ·识别真核表位抗体筛选 | 第103-104页 |
| ·识别内源性CD25抗原表位的抗体筛选 | 第104-106页 |
| ·流式法检测DuCD25~+细胞的建立 | 第106-107页 |
| ·抗体阻断实验 | 第107页 |
| 4 讨论 | 第107-110页 |
| 第八章 禽流感病毒H9N2亚型感染鸭CD25表型细胞的动态分析 | 第110-115页 |
| 1.材料 | 第111-112页 |
| ·病毒 | 第111页 |
| ·动物 | 第111页 |
| ·试剂 | 第111-112页 |
| 2.方法 | 第112页 |
| ·动物感染 | 第112页 |
| ·流式用脾细胞样品分离 | 第112页 |
| ·CD25表型细胞的动态分析 | 第112页 |
| 3.结果 | 第112-113页 |
| 4 讨论 | 第113-115页 |
| 文献综述 | 第115-138页 |
| 第一章 IL-2研究综述 | 第115-128页 |
| 1 IL-2分子生物学研究 | 第115-117页 |
| ·IL-2的发现及分子克隆 | 第115-116页 |
| ·IL-2基因表达与调控 | 第116页 |
| ·IL-2蛋白结构与突变体 | 第116-117页 |
| 2 内源性IL-2纯化 | 第117-118页 |
| 3 IL-2重组表达 | 第118-120页 |
| ·原核表达 | 第118页 |
| ·真核表达 | 第118-120页 |
| 4 抗IL-2抗体 | 第120页 |
| 5 IL-2的检测方法 | 第120-122页 |
| ·ELISA与ELISPOT | 第120-121页 |
| ·IL-2活性检测法 | 第121-122页 |
| 6 IL-2效应细胞 | 第122-123页 |
| ·IL-2对抗原激活T细胞的效应 | 第122页 |
| ·IL-2对抗原激活B细胞的效应 | 第122-123页 |
| ·IL-2对NK细胞的效应 | 第123页 |
| 7 IL-2转基因、基因敲除和疾病研究模型 | 第123-124页 |
| 8 IL-2药效动力学 | 第124页 |
| 9 IL-2的副作用 | 第124-125页 |
| 10 IL-2的应用 | 第125-126页 |
| ·人IL-2蛋白的应用 | 第125-126页 |
| ·动物IL-2基因免疫 | 第126页 |
| 11 禽IL-2研究进展 | 第126-127页 |
| 12 结论 | 第127-128页 |
| 第二章 IL-2受体alpha研究综述 | 第128-138页 |
| 1 IL-2Rα分子生物学 | 第128-132页 |
| ·IL-2Rα的发现 | 第128页 |
| ·IL-2Rα的分子克隆与基因结构 | 第128-129页 |
| ·IL-2Rα基因的转录与诱导因子 | 第129-130页 |
| ·IL-2Rα体外表达 | 第130-131页 |
| ·IL-2Rα蛋白结构与功能分析 | 第131-132页 |
| ·IL-2Rα转基因模型 | 第132页 |
| 2 Anti-TAC抗体 | 第132-134页 |
| ·Anti-TAC的制备 | 第132-133页 |
| ·Anti-TAC免疫学功能 | 第133页 |
| ·Anti-TAC与βγ的发现 | 第133-134页 |
| ·sIL-2Rα | 第134页 |
| ·anti-TAC与IL-2Rα发育生物学 | 第134页 |
| 3 IL-2Rα细胞亚群 | 第134-136页 |
| 4 IL-2Rα应用研究 | 第136页 |
| ·抗体导弹(与其他如毒素偶连或者融合) | 第136页 |
| ·人源化IL-2Rα抗体 | 第136页 |
| 5 禽IL-2Rα研究进展 | 第136-137页 |
| 6 总结 | 第137-138页 |
| 全文结论及后续工作设想 | 第138-139页 |
| 参考文献(References) | 第139-157页 |
| 附录 常用缓冲液及培养基配方 | 第157-164页 |
| 致谢 | 第164-165页 |
| 攻读博士期间的科研成果 | 第165-166页 |
