| 摘要 | 第1-3页 |
| ABSTRACT | 第3-4页 |
| 缩略表 | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-7页 |
| 第一章 综述 | 第7-29页 |
| ·蛋白质交联研究进展 | 第7-16页 |
| ·和蛋白质交联相关的一些生理过程 | 第7-9页 |
| ·蛋白质交联与许多疾病的形成相关 | 第9-11页 |
| ·蛋白质交联机理 | 第11-16页 |
| ·协助蛋白质折叠的生物大分子 | 第16-23页 |
| ·分子伴侣 | 第17-19页 |
| ·折叠酶 | 第19-23页 |
| ·固定化金属螯合亲和层析技术 | 第23-27页 |
| ·基本原理及应用 | 第23-25页 |
| ·纯化重组蛋白 | 第25-27页 |
| ·二氢叶酸还原酶简介及本文研究目的 | 第27-29页 |
| 第二章 材料与方法 | 第29-40页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-40页 |
| ·PCR方法合成二氢叶酸还原酶基因 | 第29-30页 |
| ·PCR定点突变技术合成突变型二氢叶酸还原酶基因 | 第30-31页 |
| ·二氢叶酸还原酶基因的克隆 | 第31-36页 |
| ·IPTG诱导表达及DHFR的纯化 | 第36-37页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第37-38页 |
| ·热诱导去折叠(thermal unfolding) | 第38页 |
| ·蛋白质印迹(Western Blot) | 第38-40页 |
| 第三章 结果与分析 | 第40-49页 |
| ·PCR法合成二氢叶酸还原酶基因及PCR定点突变法合成突变型二氢叶酸还原酶基因 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定及筛选克隆DHFR基因 | 第41-42页 |
| ·IPTG诱导表达及DHFR纯化 | 第42-44页 |
| ·重组蛋白的热诱导去折叠反应 | 第44-49页 |
| ·野生型DHFR的体外交联 | 第44-46页 |
| ·Cys突变为Ser影响蛋白质分子间交联 | 第46-47页 |
| ·异源蛋白质分子间的交联 | 第47-49页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第49-54页 |
| ·讨论 | 第49-54页 |
| ·DHFR热诱导去折叠结果讨论 | 第49-51页 |
| ·蛋白质热诱导去折叠过程中应注意的几个问题 | 第51-52页 |
| ·定点突变 | 第52-53页 |
| ·TALON金属亲和层析法纯化DHFR | 第53-54页 |
| ·展望 | 第54页 |
| 第五章 小结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 附图 | 第61-65页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |