| 1 引言 | 第1-15页 |
| ·猪细小病毒的形态和理化特性 | 第10-11页 |
| ·猪细小病毒的分子生物学特性 | 第11-12页 |
| ·PPV基因组结构特征 | 第11页 |
| ·结构多肽与非结构多肽 | 第11-12页 |
| ·猪细小病毒感染的流行病学 | 第12页 |
| ·猪细小病毒的预防和控制 | 第12-13页 |
| ·猪细小病毒的检测方法 | 第13-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-27页 |
| ·毒株与细胞 | 第15页 |
| ·细胞培养所需主要试剂 | 第15页 |
| ·病毒纯化及免疫球蛋白IgG制备所需主要试剂 | 第15页 |
| ·辣根过氧化物酶标记抗体的制备及ELISA检测所需主要试剂 | 第15-16页 |
| ·免疫胶体金制备及其检测所需主要试剂 | 第16页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR)所需主要试剂 | 第16页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳所需主要试剂 | 第16-17页 |
| ·主要溶液的配制 | 第17-18页 |
| ·巴比妥缓冲液(VB) | 第17页 |
| ·硝酸银显影液(现配现用) | 第17页 |
| ·饱和硫酸铵溶液 | 第17页 |
| ·0.01M pH7.0 PBS缓冲液 | 第17页 |
| ·0.0175M pH6.7 PBS缓冲液 | 第17页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳溶液 | 第17-18页 |
| ·SDS-PAGE制备 | 第18页 |
| ·双夹心ELISA所需主要溶液 | 第18页 |
| ·硝酸纤维素膜 | 第18页 |
| ·主要仪器 | 第18-19页 |
| ·PPV抗原的制备 | 第19页 |
| ·PPV的增殖与收获 | 第19页 |
| ·PPV的浓缩与纯化 | 第19页 |
| ·免疫血清的制备 | 第19-20页 |
| ·兔抗PPV免疫血清的制备 | 第19页 |
| ·豚鼠抗PPV免疫血清的制备 | 第19-20页 |
| ·羊抗兔免疫血清的制备 | 第20页 |
| ·免疫球蛋白IgG的制备 | 第20-21页 |
| ·兔抗PPV免疫球蛋白IgG粗提物的制备 | 第20页 |
| ·豚鼠抗PPV免疫球蛋白IgG粗提物的制备 | 第20页 |
| ·羊抗兔免疫球蛋白IgG的分离、纯化 | 第20-21页 |
| ·羊抗兔免疫球蛋白IgG纯度鉴定 | 第21页 |
| ·标记抗体的制备 | 第21-22页 |
| ·辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体的制备 | 第21页 |
| ·免疫胶体金的制备 | 第21-22页 |
| ·双夹心ELISA检测PPV抗原方法的建立 | 第22-23页 |
| ·最佳试验条件的确定 | 第22页 |
| ·双夹心ELISA操作程序 | 第22-23页 |
| ·双夹心ELISA特异性测定 | 第23页 |
| ·双夹心ELISA敏感性测定及其与HAT的比较 | 第23页 |
| ·双夹心ELISA重复性测定 | 第23页 |
| ·间接Dot-ELISA检测猪PPV抗原方法的建立 | 第23-24页 |
| ·兔抗PPVIgG最适浓度的确定 | 第23页 |
| ·间接Dot-ELISA操作程序 | 第23-24页 |
| ·间接Dot-ELISA特异性测定 | 第24页 |
| ·间接Dot-ELISA敏感性测定及其与HAT的比较 | 第24页 |
| ·间接Dot-ELISA重复性测定 | 第24页 |
| ·免疫金银染色法(IGSS)检测PPV抗原方法的建立 | 第24-25页 |
| ·兔抗PPVIgG最适浓度的确定 | 第24页 |
| ·IGSS操作程序 | 第24-25页 |
| ·IGSS特异性测定 | 第25页 |
| ·IGSS敏感性测定及其与HAT的比较 | 第25页 |
| ·IGSS重复性测定 | 第25页 |
| ·PCR检测猪PPV抗原方法的建立 | 第25-26页 |
| ·引物的合成 | 第25页 |
| ·PPV模板DNA的制各 | 第25-26页 |
| ·PCR扩增 | 第26页 |
| ·省去模板的预变性，直接进入循环 | 第26页 |
| ·PCR特异性测定 | 第26页 |
| ·PCR敏感性测定 | 第26页 |
| ·临床样本的检测 | 第26-27页 |
| ·自然感染猪样本的采集与处理 | 第26页 |
| ·临床样本检测的比较 | 第26-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-36页 |
| ·PPV抗原的制备结果 | 第27页 |
| ·PPV细胞培养物HA滴度测定结果 | 第27页 |
| ·PPV抗原的浓缩 | 第27页 |
| ·PPV抗原的纯化 | 第27页 |
| ·免疫血消的制备结果 | 第27页 |
| ·兔抗及豚鼠抗PPV免疫血消HI滴度的测定 | 第27页 |
| ·羊抗兔免疫血清琼扩滴度的测定 | 第27页 |
| ·免疫球蛋白IgG的制备结果 | 第27-28页 |
| ·兔抗及豚鼠抗PPV免疫球蛋白IgG粗提物蛋白浓度的测定 | 第27-28页 |
| ·羊抗兔免疫球蛋白IgG的分离、纯化 | 第28页 |
| ·标记抗体的制备结果 | 第28-29页 |
| ·辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体结果 | 第28页 |
| ·胶体金标记抗体制备 | 第28-29页 |
| ·双夹心ELISA检测PPV抗原方法的建立 | 第29-31页 |
| ·最佳试验条件的确定 | 第29页 |
| ·双夹心ELISA特异性测定 | 第29-30页 |
| ·双夹心ELISA敏感性测定及其与HAT的比较 | 第30-31页 |
| ·双夹心ELISA重复性测定 | 第31页 |
| ·间接Dot-ELISA检测猪PPV抗原方法的建立 | 第31-32页 |
| ·兔抗PPVIgG最适浓度的确定 | 第31页 |
| ·间接Dot-ELISA特异性测定 | 第31页 |
| ·间接Dot-ELISA敏感性测定及其与HAT的比较 | 第31-32页 |
| ·间接Dot-ELISA重复性测定 | 第32页 |
| ·IGSS检测猪PPV抗原方法的建立 | 第32-33页 |
| ·兔抗PPVIgG最适浓度的确定 | 第32页 |
| ·IGSS特异性测定 | 第32页 |
| ·IGSS敏感性测定及其与HAT的比较 | 第32-33页 |
| ·IGSS重复性测定 | 第33页 |
| ·PCR检测猪PPV抗原方法的建立 | 第33-35页 |
| ·不同核酸提取方法的PCR扩增结果 | 第33页 |
| ·改变反应条件后的PCR扩增结果 | 第33-34页 |
| ·PCR特异性测定结果 | 第34-35页 |
| ·临床样品的检测结果 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-39页 |
| 5 结论 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-44页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第44-50页 |
| 作者简历 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51页 |
