| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 前言 | 第14-18页 |
| 英文缩写 | 第18-20页 |
| 第一章 钩端螺旋体溶血素基因功能的研究 | 第20-138页 |
| 第一节 钩端螺旋体体外培养和溶血活性的检测 | 第20-31页 |
| 序 | 第20-21页 |
| 1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-24页 |
| 3 实验结果 | 第24-29页 |
| ·钩端螺旋体体外培养 | 第24-27页 |
| ·钩端螺旋体生长状况考察 | 第24-25页 |
| ·透射电镜下钩端螺旋体形态 | 第25页 |
| ·钩端螺旋体在EMJH或Korthof液体培养基中生长曲线的测定 | 第25-26页 |
| ·钩端螺旋体毒力的考察 | 第26-27页 |
| ·钩端螺旋体菌体超声上清液及培养液蛋白浓度测定 | 第27-28页 |
| ·钩端螺旋体溶血活性的检测 | 第28-29页 |
| 4 小结 | 第29页 |
| 5 讨论 | 第29-31页 |
| 第二节 钩端螺旋体溶血素基因的注释、克隆表达和活性检验 | 第31-63页 |
| 序 | 第31-32页 |
| 1 实验材料 | 第32-35页 |
| 2 实验方法 | 第35-41页 |
| 3 实验结果 | 第41-61页 |
| ·钩端螺旋体溶血素基因的注释与分类 | 第41-53页 |
| ·钩端螺旋体溶血素基因特征 | 第41-42页 |
| ·钩端螺旋体溶血素基因分类 | 第42-53页 |
| ·钩端螺旋体溶血素基因的克隆与表达 | 第53页 |
| ·重组溶血素蛋白的诱导表达 | 第53-55页 |
| ·重组溶血素蛋白溶血活性检测 | 第55-56页 |
| ·溶血素鞘磷脂酶活性的检测 | 第56-58页 |
| ·薄层层析法检测 | 第56-57页 |
| ·高效液相色谱法检测 | 第57-58页 |
| ·鞘磷脂酶类溶血素LA1029的底物特异性考察 | 第58-59页 |
| ·各种因子对鞘磷脂酶LA1029的酶活性影响 | 第59-60页 |
| ·钩端螺旋体溶血素基因的提交 | 第60-61页 |
| 4 小结 | 第61页 |
| 5 讨论 | 第61-63页 |
| 第三节 钩端螺旋体溶血素基因的转录和表达 | 第63-80页 |
| 序 | 第63页 |
| 1 实验材料 | 第63页 |
| 2 实验方法 | 第63-68页 |
| 3 实验结果 | 第68-79页 |
| ·钩端螺旋体总RNA的抽提 | 第68-69页 |
| ·钩端螺旋体溶血素基因的转录情况考察 | 第69-71页 |
| ·重组溶血素蛋白多克隆抗体制备及滴度测定 | 第71-73页 |
| ·重组溶血素蛋白的变性纯化 | 第71-72页 |
| ·溶血素多克隆抗体滴度测定 | 第72-73页 |
| ·Western-blot检测钩端螺旋体溶血素的表达 | 第73-76页 |
| ·分泌型钩端螺旋体溶血素的检测 | 第76-79页 |
| 4 小结 | 第79页 |
| 5 讨论 | 第79-80页 |
| 第四节 钩端螺旋体溶血素对宿主细胞结构和功能的影响 | 第80-111页 |
| 序 | 第80页 |
| 1 实验材料 | 第80-83页 |
| 2 实验方法 | 第83-89页 |
| 3 实验结果 | 第89-110页 |
| ·倒置显微镜观察溶血素对细胞的作用及溶血素抗体的保护作用 | 第89-92页 |
| ·小鼠淋巴细胞形态的变化 | 第89-90页 |
| ·小鼠巨噬细胞形态的变化 | 第90-91页 |
| ·人传代细胞形态的变化 | 第91-92页 |
| ·透射电镜观察溶血素对细胞的作用 | 第92-98页 |
| ·溶血素作用绵羊红细胞后形态的变化 | 第93-94页 |
| ·溶血素作用人组织细胞后形态的变化 | 第94-98页 |
| ·扫描电镜观察溶血素对细胞的作用 | 第98-101页 |
| ·小鼠巨噬细胞形态的变化 | 第99-100页 |
| ·人肾细胞293形态的变化 | 第100-101页 |
| ·溶血素对细胞凋亡的影响 | 第101-106页 |
| ·溶血素LA1029引起的细胞凋亡 | 第102-104页 |
| ·溶血素LA3937引起的细胞凋亡 | 第104-106页 |
| ·溶血素作用BALB／C小鼠免疫细胞后细胞因子的诱生 | 第106-110页 |
| 4 小结 | 第110页 |
| 5 讨论 | 第110-111页 |
| 第五节 基因芯片检测溶血素引起的细胞表达谱改变 | 第111-138页 |
| 序 | 第111-112页 |
| 1 实验材料与方法 | 第112-115页 |
| 2 实验结果 | 第115-137页 |
| ·基因芯片质控 | 第115-119页 |
| ·总RNA抽提质控 | 第115-116页 |
| ·扫描信号质控 | 第116-119页 |
| ·基因芯片检测结果 | 第119-120页 |
| ·双色荧光叠加图 | 第119-120页 |
| ·杂交信号强度散点图 | 第120页 |
| ·差异表达基因的分类 | 第120-121页 |
| ·差异表达基因的说明 | 第121-137页 |
| 3 小结与讨论 | 第137-138页 |
| 第二章 钩端螺旋体血小板激活因子乙酰化酶基因的功能研究 | 第138-165页 |
| 序 | 第138-139页 |
| 1 实验材料 | 第139-140页 |
| 2 实验方法 | 第140-143页 |
| 3 实验结果 | 第143-163页 |
| ·钩端螺旋体中与出血相关基因的预测 | 第143-145页 |
| ·血小板激活因子乙酰水解酶基因(paf-ah)的注释 | 第145-149页 |
| ·钩端螺旋体PAF-AH一、二级结构相似性分析 | 第146-147页 |
| ·钩端螺旋体PAF-AH三级结构模拟 | 第147页 |
| ·钩端螺旋体PAF-AH穿膜结构与信号肽预测 | 第147-149页 |
| ·钩端螺旋体病出血模型 | 第149-152页 |
| ·钩端螺旋体中与出血相关基因转录的考察 | 第152-154页 |
| ·paf-ah基因的克隆、表达及该蛋白在钩体菌中表达情况的考察 | 第154-155页 |
| ·血小板激活因子乙酰化酶米氏常数(Km)测定 | 第155-158页 |
| ·重组PAF-AH蛋白对正常人血小板聚集功能的影响 | 第158页 |
| ·不同培养条件不同毒力株的PAF-AH酶活力比较 | 第158-160页 |
| ·正常人与钩体病患者血清中PAF-AH酶活性的比较 | 第160-163页 |
| 4 小结 | 第163页 |
| 6 讨论 | 第163-165页 |
| 第三章 钩端螺旋体凋亡基因的鉴定 | 第165-188页 |
| 序 | 第165-167页 |
| 1 实验材料 | 第167-168页 |
| 2 实验方法 | 第168-171页 |
| 3 实验结果 | 第171-186页 |
| ·钩端螺旋体凋亡基因的分布与结构特征 | 第171-172页 |
| ·VapB与VapC基因的注释与结构分析 | 第172-173页 |
| ·VapB与VapC基因的注释与结构分析 | 第173-174页 |
| ·VapC基因对大肠杆菌生长的抑制作用以及VapB基因的去抑制作用 | 第174-175页 |
| ·vapBC locus在钩端螺旋体不同菌株中的保守性考察 | 第175-176页 |
| ·vapBC系统对质粒稳定性的作用 | 第176-177页 |
| ·凋亡基因的表达与培养时间的关系 | 第177页 |
| ·染色体编码的TA凋亡基因的进化分析 | 第177-186页 |
| 4 小结 | 第186-187页 |
| 5 讨论 | 第187-188页 |
| 结论 | 第188-189页 |
| 参考文献 | 第189-203页 |
| 附图 | 第203-215页 |
| 致谢 | 第215-216页 |
| 发表文章 | 第216页 |
