| 中文摘要 | 第1-16页 |
| 英文摘要 | 第16-19页 |
| 第一篇 文献综述:哺乳动物胚胎干细胞研究进展 | 第19-59页 |
| 前言 | 第19-20页 |
| 第一章 胚胎干细胞的研究历史 | 第20-23页 |
| 1 EC细胞的研究历史 | 第20页 |
| 2 小鼠ES细胞研究历史 | 第20-21页 |
| 3 家畜ES细胞的研究历史 | 第21-23页 |
| 第二章 胚胎干细胞的概念及特性 | 第23-26页 |
| 1 ES细胞研究中常用名词的概念 | 第23-24页 |
| ·ES细胞(Embryonic stem cell，ES细胞) | 第23页 |
| ·EG细胞(胚胎生殖细胞) | 第23页 |
| ·EC细胞 | 第23页 |
| ·PGCs细胞 | 第23-24页 |
| 2 ES细胞的基本特性 | 第24-25页 |
| ·全能性和多能性 | 第24-25页 |
| ·ES细胞体外增殖 | 第25页 |
| ·ES细胞可操作性 | 第25页 |
| ·ES细胞形态特性 | 第25页 |
| 3 ES细胞特性之间的关系 | 第25-26页 |
| 第三章 胚胎干细胞分离与克隆的方法 | 第26-31页 |
| 1 早期胚胎的选择 | 第26页 |
| 2 早期胚胎的选择方法 | 第26-27页 |
| ·碱性磷酸酶染色法或荧光抗体标记法 | 第26-27页 |
| ·实验筛选适宜于分离ES细胞的胚胎 | 第27页 |
| 3 早期胚胎的操作及培养 | 第27-30页 |
| ·早期胚胎细胞培养法 | 第27页 |
| ·胚胎与饲养层细胞共同培养法 | 第27-28页 |
| ·ICM与饲养层细胞共同培养法 | 第28-29页 |
| ·PGCs与饲养层细胞共同培养法 | 第29-30页 |
| ·裸胚与饲养层细胞共同培养法 | 第30页 |
| ·热休克处理胚胎与饲养层细胞共同培养 | 第30页 |
| ·切割胚胎培养 | 第30页 |
| 4 小结 | 第30-31页 |
| 第四章 分化抑制物对胚胎干细胞分离与克隆的影响 | 第31-37页 |
| 1 不同类型饲养层对ES细胞克隆效率的影响 | 第31-32页 |
| 2 条件培养基对动物ES细胞克隆的影响 | 第32-33页 |
| 3 分化抑制因子(Differentiation inhibitory activity，DIA) | 第33-36页 |
| ·分化抑制因子对ES细胞分离与克隆的影响 | 第33-35页 |
| ·分化抑制因子作用的机制 | 第35-36页 |
| 4 小结 | 第36-37页 |
| 第五章 影响动物胚胎干细胞分离与克隆的因素 | 第37-39页 |
| 1 培养液 | 第37页 |
| 2 添加剂的选择 | 第37-38页 |
| 3 遗传因素 | 第38-39页 |
| 第六章 动物胚胎干细胞的鉴定方法 | 第39-43页 |
| 1 形态鉴定 | 第39页 |
| 2 ES细胞生长行为鉴定 | 第39页 |
| 3 免疫学方法鉴定 | 第39-40页 |
| 4 全能性和多能性鉴定 | 第40-43页 |
| ·胚胎嵌合法 | 第40-41页 |
| ·嵌合体制备 | 第40-41页 |
| ·嵌合体检测 | 第41页 |
| ·ES细胞的诱导分化检测技术 | 第41-42页 |
| ·体外分化试验 | 第41-42页 |
| ·体内分化试验 | 第42页 |
| ·ES细胞核移植技术 | 第42页 |
| ·核型分析 | 第42-43页 |
| 第七章 研究胚胎干细胞的意义 | 第43-58页 |
| 1 生产克隆动物 | 第43-47页 |
| ·利用ES细胞生产克隆动物的优势 | 第43-44页 |
| ·利用ES细胞克隆动物的方法 | 第44-45页 |
| ·利用ES细胞克隆动物存在的问题 | 第45-46页 |
| ·动物克隆技术的新发展 | 第46-47页 |
| 2 ES细胞遗传操作及其应用 | 第47-57页 |
| ·对ES细胞进行遗传操作的方法 | 第47-50页 |
| ·ES细胞遗传操作的应用前景 | 第50-57页 |
| ·生产转基因动物 | 第50-53页 |
| ·生产用于人类器官移植的动物器官 | 第53-54页 |
| ·研究真核细胞基因表达与调控 | 第54-55页 |
| ·建立人类遗传病研究的动物模型 | 第55-56页 |
| ·研究ES细胞在胚胎发育过程中的功能 | 第56页 |
| ·研究基因的表达及其产物的生理作用 | 第56页 |
| ·研究同源重组序列长度与外源基因整合效率的关系 | 第56-57页 |
| 3 利用ES细胞研究细胞分化的机制 | 第57-58页 |
| 结束与展望 | 第58-59页 |
| 第二篇 试验研究:牛胚胎干细胞分离与克隆技术体系的研究 | 第59-95页 |
| 第八章 牛胚胎干细胞饲养层培养体系的建立 | 第59-69页 |
| 1 材料和方法 | 第60-63页 |
| ·材料 | 第60页 |
| ·试验动物 | 第60页 |
| ·重要试剂 | 第60页 |
| ·重要仪器 | 第60页 |
| ·方法 | 第60-63页 |
| ·有关溶液配制 | 第60-61页 |
| ·小鼠胎儿和新生犊牛睾丸的收集与处理 | 第61-62页 |
| ·原代成纤维细胞分离和培养 | 第62页 |
| ·成纤维细胞继代培养 | 第62页 |
| ·成纤维细胞饲养层制备 | 第62-63页 |
| ·培养体系检测 | 第63页 |
| 2 试验结果 | 第63-66页 |
| ·成纤维细胞生长行为 | 第63页 |
| ·成纤维细胞的增殖速度 | 第63页 |
| ·胎儿日龄对胎儿成纤维细胞生长的影响 | 第63-64页 |
| ·血清种类和血清浓度对成纤维细胞增殖的影响 | 第64页 |
| ·添加物对小鼠胎儿成纤维细胞增殖的影响 | 第64页 |
| ·胰酶消化时间对成纤维细胞活力的影响 | 第64-65页 |
| ·细胞密度对细胞增殖的影响 | 第65页 |
| ·酶消化时间对成纤维细胞继代培养的影响 | 第65页 |
| ·成纤维细胞饲养层分离小鼠胚胎干细胞的效果 | 第65-66页 |
| 3 讨论 | 第66-68页 |
| ·分离成纤维细胞的胰蛋白酶作用的时间 | 第66页 |
| ·胎儿日龄对成纤维细胞生长的影响 | 第66-67页 |
| ·细胞密度与细胞增殖和老化的关系 | 第67页 |
| ·血清及添加物对成纤维细胞生长影响的机制 | 第67页 |
| ·成纤维细胞饲养层与ES细胞分离的关系 | 第67-68页 |
| 4 结论 | 第68-69页 |
| 第九章 小鼠胎儿和牛皋丸成纤维细胞的冷冻保存 | 第69-75页 |
| 1 材料与方法 | 第69-71页 |
| ·试验动物、试剂及主要仪器 | 第69页 |
| ·溶液的配制 | 第69页 |
| ·用于冷冻成纤维细胞的制备 | 第69-70页 |
| ·成纤维细胞冷冻 | 第70页 |
| ·成纤维细胞解冻 | 第70页 |
| ·冷冻成纤维细胞活力评定 | 第70页 |
| ·试验设计 | 第70-71页 |
| 2 结果与分析 | 第71-72页 |
| ·两种冷冻液冷冻成纤维细胞的效果 | 第71页 |
| ·平衡时间对成纤维细胞冷冻效果的影响 | 第71页 |
| ·降温速度对成纤维细胞冷冻效果的影响 | 第71-72页 |
| ·诱发结冰对成纤维细胞冷冻效果的影响 | 第72页 |
| ·解冻液对细胞冷冻效果的影响 | 第72页 |
| ·解冻方式对细胞生长增殖的影响 | 第72页 |
| 3 讨论 | 第72-74页 |
| ·冷冻与细胞冷冻效果 | 第72-73页 |
| ·冷冻保护液与平衡时间 | 第73页 |
| ·冷冻液与降温速度 | 第73页 |
| ·在成纤维细胞冷冻过程中，可以不进行诱发结冰 | 第73-74页 |
| ·以乙二醇和蔗糖作冷冻保护剂解冻方式更为简单 | 第74页 |
| 4 小结 | 第74-75页 |
| 第十章 牛胚胎在 MEF细胞饲养层的生长行为 | 第75-83页 |
| 1 材料和方法 | 第75-77页 |
| ·试验动物 | 第75页 |
| ·冲胚液配制 | 第75-76页 |
| ·胚胎采集 | 第76-77页 |
| ·小鼠胚胎采集 | 第76页 |
| ·牛胚胎采集 | 第76页 |
| ·胚胎培养 | 第76-77页 |
| ·胚胎及内细胞团AKP染色 | 第77页 |
| ·试验结果的观察与统计 | 第77页 |
| 2 试验结果 | 第77-80页 |
| ·滋养层细胞的生长行为 | 第77-78页 |
| ·ICM生长行为 | 第78页 |
| ·ICM分化 | 第78-79页 |
| ·不同类型胚胎的生长行为 | 第79页 |
| ·全胚和裸胚 | 第79页 |
| ·桑棋胚、囊胚、孵化胚和卵裂球 | 第79页 |
| ·牛和小鼠胚胎体外分化抑制培养发育进程的比较 | 第79-80页 |
| 3 讨论 | 第80-81页 |
| ·ICM传代时间 | 第80页 |
| ·体外培养ICM形态 | 第80页 |
| ·胚胎类型对ICM生长的影响 | 第80-81页 |
| 4 小结 | 第81-83页 |
| 第十一章 牛胚胎干细胞分离与克隆的研究 | 第83-95页 |
| 1 材料和方法 | 第83-85页 |
| ·实验动物选择和胚胎获取 | 第83页 |
| ·试剂和溶液配制 | 第83页 |
| ·饲养层制备 | 第83页 |
| ·胚胎处理和胚胎培养条件 | 第83-84页 |
| ·ICM初次传代 | 第84页 |
| ·ES细胞继代培养 | 第84页 |
| ·AKP染色 | 第84页 |
| ·核型分析 | 第84-85页 |
| ·ES细胞分化能力检测 | 第85页 |
| 2 结果与分析 | 第85-91页 |
| ·ES细胞的分离与克隆 | 第85-86页 |
| ·ICM初次传代后的表现 | 第85-86页 |
| ·ES细胞生长行为 | 第86页 |
| ·小鼠和牛ES细胞的分离与克隆 | 第86页 |
| ·ES细胞鉴定 | 第86-87页 |
| ·ES细胞及其集落形态 | 第86-87页 |
| ·ES细胞AKP染色 | 第87页 |
| ·核型分析 | 第87页 |
| ·ES细胞分化能力 | 第87页 |
| ·影响ES细胞克隆效率的因素 | 第87-91页 |
| ·犊牛血清质量与数量 | 第87-88页 |
| ·培养液 | 第88-89页 |
| ·胚胎质量 | 第89页 |
| ·饲养层 | 第89页 |
| ·消化液浓度及作用时间 | 第89-90页 |
| ·添加物 | 第90-91页 |
| 3 讨论 | 第91-94页 |
| ·胚胎类型、ICM形态与ES细胞克隆的关系 | 第91页 |
| ·ICM初次传代后出现的集落及其命运 | 第91-92页 |
| ·影响胚胎ICM增殖及ES细胞生长的因素 | 第92-93页 |
| ·饲养层 | 第92页 |
| ·培养液 | 第92-93页 |
| ·消化液作用对ES细胞分离与克隆的影响 | 第93页 |
| ·ES细胞鉴定 | 第93-94页 |
| 4 结论 | 第94-95页 |
| 本论文创新之处 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-116页 |
| 图版说明 | 第116-117页 |
| 图版 | 第117-119页 |
