| 提要 | 第1-8页 |
| 第一章 前言 | 第8-22页 |
| 第一节 乙酰辅酶A 羧化酶简介 | 第8-9页 |
| 第二节 ACCASE 的分类 | 第9-11页 |
| ·多亚基ACCase | 第9页 |
| ·多结构域ACCase | 第9-11页 |
| 第三节 ACCASE 的结构 | 第11-14页 |
| ·生物素羧化酶（BC）的结构 | 第11-12页 |
| ·生物素载体蛋白（BCCP）的结构 | 第12页 |
| ·羧基转移酶（CT）的结构 | 第12-14页 |
| 第四节 ACCASE 的生物学功能 | 第14-17页 |
| ·ACCase 在植物中的功能 | 第16页 |
| ·ACCase 在动物中的功能 | 第16页 |
| ·ACCase 在其它生物中的功能 | 第16-17页 |
| 第五节 ACCASE 的抑制剂及其应用 | 第17-19页 |
| ·作用于 CT 功能域的抑制剂 | 第17-19页 |
| ·作用于BC 功能域的抑制剂 | 第19页 |
| 第六节 本论文研究背景及设计思想 | 第19-22页 |
| ·研究背景 | 第19-21页 |
| ·设计思想 | 第21-22页 |
| 第二章 黑麦草质体ACCASE CT 功能域基因克隆 | 第22-37页 |
| 引言 | 第22页 |
| 第一节 实验材料 | 第22-25页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·实验菌株及种子 | 第23页 |
| ·实验用质粒 | 第23页 |
| ·溶液及培养基配制 | 第23-25页 |
| 第二节 实验方法 | 第25-31页 |
| ·黑麦草总RNA 提取 | 第25-26页 |
| ·黑麦草cDNA 文库的制备—逆转录反应 | 第26-27页 |
| ·PCR 扩增黑麦草ACCase CT 功能域基因 | 第27-28页 |
| ·目的基因的T-A 克隆 | 第28-31页 |
| ·目的蛋白的基本性质预测 | 第31页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第31-36页 |
| ·黑麦草栽培 | 第31-32页 |
| ·黑麦草幼苗总RNA 提取 | 第32-33页 |
| ·黑麦草ACCase CT 功能域cDNA 合成 | 第33-34页 |
| ·特异引物扩增目的基因的PCR 电泳结果 | 第34页 |
| ·目的基因的T-A 克隆 | 第34-35页 |
| ·目的基因的确定 | 第35页 |
| ·目的蛋白的基本性质预测 | 第35-36页 |
| 本章小结 | 第36-37页 |
| 第三章 黑麦草质体ACCASE CT 功能域基因在大肠杆菌中的表达及鉴定 | 第37-48页 |
| 引言 | 第37页 |
| 第一节 实验材料 | 第37-39页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37-38页 |
| ·实验菌株 | 第38页 |
| ·实验用质粒 | 第38页 |
| ·溶液及培养基配制 | 第38-39页 |
| 第二节 实验方法 | 第39-45页 |
| ·黑麦草ACCase CT 功能域基因重组质粒的构建 | 第39-42页 |
| ·重组质粒2.6Kb-pET28a 转化大肠杆菌表达宿主菌 | 第42-43页 |
| ·目的基因的诱导表达 | 第43页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第43-44页 |
| ·表达条件的优化 | 第44-45页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第45-47页 |
| ·重组质粒2.6Kb-pET28a 的构建及鉴定结果 | 第45页 |
| ·重组质粒的表达 | 第45-47页 |
| ·表达条件的优化 | 第47页 |
| 本章小结 | 第47-48页 |
| 第四章 黑麦草质体ACCASE CT功能域基因在毕赤酵母中的表达及鉴定 | 第48-60页 |
| 引言 | 第48页 |
| 第一节 实验材料 | 第48-51页 |
| ·主要仪器 | 第48-49页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·实验菌株 | 第49页 |
| ·实验用质粒 | 第49页 |
| ·溶液及培养基配制 | 第49-51页 |
| 第二节 实验方法 | 第51-55页 |
| ·用全质粒PCR 的方法突变目的基因 | 第51-52页 |
| ·毕赤酵母表达载体的构建 | 第52-54页 |
| ·毕赤酵母的甲醇诱导分泌表达 | 第54页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第54-55页 |
| ·表达条件的优化 | 第55页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第55-59页 |
| ·突变目的基因序列的确定 | 第55-56页 |
| ·重组质粒2.6Kb-pPIC9K 的鉴定 | 第56页 |
| ·酵母转化子His~+ Mut~s 营养表型筛选及其PCR 鉴定 | 第56-58页 |
| ·目的蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第58页 |
| ·表达条件的优化 | 第58-59页 |
| 本章小结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 摘要 | 第64-67页 |
| ABSTRACT | 第67-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
