| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 英文缩略词中英文注释表 | 第20-22页 |
| 第一章 绪论 | 第22-43页 |
| 1.1 顺铂与急性肾损伤 | 第22页 |
| 1.1.1 急性肾损伤 | 第22页 |
| 1.1.2 顺铂 | 第22页 |
| 1.2 自噬与疾病 | 第22-29页 |
| 1.2.1 自噬形成过程 | 第22-25页 |
| 1.2.2 自噬与神经退行性变 | 第25-26页 |
| 1.2.3 自噬与心血管疾病 | 第26页 |
| 1.2.4 自噬与衰老 | 第26-27页 |
| 1.2.5 自噬与肿瘤 | 第27页 |
| 1.2.6 自噬与急性肾损伤 | 第27-29页 |
| 1.2.6.1 自噬与缺血再灌注诱导的肾损伤 | 第27-28页 |
| 1.2.6.2 自噬与脓毒症诱导的急性肾损伤 | 第28页 |
| 1.2.6.3 自噬与药物诱导的AKI | 第28-29页 |
| 1.3 间质干细胞与组织损伤修复 | 第29-32页 |
| 1.3.1 间质干细胞概述 | 第29-30页 |
| 1.3.2 间质干细胞与心肌损伤 | 第30页 |
| 1.3.3 间质干细胞与皮肤损伤 | 第30-31页 |
| 1.3.4 间质干细胞与肝纤维化 | 第31页 |
| 1.3.5 间质干细胞与急性肾损伤 | 第31-32页 |
| 1.4 MSC来源的exosomes与损伤修复 | 第32-36页 |
| 1.4.1 Exosomes的生物学特性 | 第32-33页 |
| 1.4.2 MSC来源的exosomes与心血管损伤 | 第33-34页 |
| 1.4.3 MSC来源的exosomes与皮肤损伤 | 第34-35页 |
| 1.4.4 MSC来源的exosomes与肝纤维化 | 第35页 |
| 1.4.5 MSC来源的exosomes与急性肾损伤 | 第35-36页 |
| 1.5 1433 蛋白的生物学功能 | 第36-38页 |
| 1.5.1 1433 蛋白简介 | 第36页 |
| 1.5.2 1433 与细胞增殖和凋亡 | 第36-37页 |
| 1.5.3 1433 蛋白与自噬 | 第37-38页 |
| 1.6 本论文研究目的、研究内容、实验方案及意义 | 第38-43页 |
| 1.6.1 研究目的 | 第38-39页 |
| 1.6.1.1 体内外建立huc MSC-ex预防顺铂诱导的肾损伤模型及预防效果评价 | 第38页 |
| 1.6.1.2 探究huc MSC-ex预处理对顺铂抗肿瘤细胞的作用 | 第38页 |
| 1.6.1.3 明确huc MSC-ex预防模型中自噬的作用 | 第38页 |
| 1.6.1.4 阐明 1433ζ 在huc MSC-ex预防顺铂诱导的肾损伤模型中的作用和机制 | 第38-39页 |
| 1.6.2 研究方法 | 第39页 |
| 1.6.3 技术路线 | 第39-42页 |
| 1.6.4 研究意义 | 第42-43页 |
| 第二章 hucMSC来源exosomes的分离和鉴定 | 第43-48页 |
| 2.1 材料 | 第43-44页 |
| 2.1.1 主要试剂与实验耗材 | 第43-44页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第44页 |
| 2.2 实验方法 | 第44-45页 |
| 2.2.1 HucMSC的分离培养 | 第44页 |
| 2.2.2 Exosomes-free胎牛血清的制备 | 第44页 |
| 2.2.3 HucMSC细胞培养上清收集 | 第44-45页 |
| 2.2.4 HucMSC-ex的提取收集 | 第45页 |
| 2.2.5 HucMSC-ex浓度测定 | 第45页 |
| 2.2.6 HucMSC-ex的鉴定 | 第45页 |
| 2.3 结果 | 第45-47页 |
| 2.3.1 HucMSC-ex浓度及直径大小 | 第45-46页 |
| 2.3.2 HucMSC-ex鉴定 | 第46-47页 |
| 2.4 讨论 | 第47-48页 |
| 第三章 HucMSC来源的exosomes预防顺铂诱导的肾损伤体内外模型的建立与效果评价 | 第48-66页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第48-50页 |
| 3.1.1 主要材料 | 第48-50页 |
| 3.1.2 抗体 | 第50页 |
| 3.1.3 实验所用细胞和动物 | 第50页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第50页 |
| 3.2 实验方法 | 第50-58页 |
| 3.2.1 HucMSC-ex的标记 | 第50-51页 |
| 3.2.2 细胞的复苏 | 第51页 |
| 3.2.3 细胞培养 | 第51页 |
| 3.2.4 细胞冻存 | 第51页 |
| 3.2.5 HucMSC-ex的内化 | 第51-52页 |
| 3.2.6 HucMSC-ex预防顺铂肾损伤体外模型的建立 | 第52-53页 |
| 3.2.7 HucMSC-ex预防顺铂肾损伤体内模型的建立 | 第53页 |
| 3.2.8 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第53页 |
| 3.2.9 细胞和组织蛋白质提取 | 第53-54页 |
| 3.2.10 Western blot | 第54-56页 |
| 3.2.11 细胞免疫荧光染色 | 第56页 |
| 3.2.12 病理切片HE染色 | 第56-57页 |
| 3.2.13 组织细胞凋亡检测（TUNEL法） | 第57页 |
| 3.2.14 免疫组织化学染色 | 第57-58页 |
| 3.2.15 统计分析 | 第58页 |
| 3.3 研究结果 | 第58-64页 |
| 3.3.1 顺铂作用浓度及huc MSC-ex预处理时间的确定 | 第58-59页 |
| 3.3.2 HucMSC-ex可以被NRK-52E细胞内化 | 第59-60页 |
| 3.3.3 HucMSC-ex预处理抑制顺铂诱导的NRK-52E细胞损伤 | 第60-62页 |
| 3.3.4 HucMSC-ex预处理抑制顺铂诱导的大鼠损伤 | 第62-64页 |
| 3.4 讨论 | 第64-66页 |
| 第四章 HucMSC来源的exosomes对顺铂抗肿瘤作用的影响 | 第66-74页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第66页 |
| 4.1.1 主要试剂与耗材 | 第66页 |
| 4.1.2 主要设备 | 第66页 |
| 4.2 实验方法 | 第66-68页 |
| 4.2.1 细胞培养 | 第66页 |
| 4.2.2 体外huc MSC-ex对顺铂抗肿瘤影响模型建立 | 第66-67页 |
| 4.2.3 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第67页 |
| 4.2.4 流式细胞术检测细胞周期 | 第67页 |
| 4.2.5 icelligenece RTCA实时观察细胞的增殖 | 第67页 |
| 4.2.6 Transwell迁移实验 | 第67-68页 |
| 4.2.7 平板克隆增殖实验 | 第68页 |
| 4.2.8 统计学分析 | 第68页 |
| 4.3 实验结果 | 第68-72页 |
| 4.3.1 HucMSC-ex预处理对顺铂诱导的胃癌细胞凋亡、周期的影响 | 第68-70页 |
| 4.3.2 HucMSC-ex预处理对顺铂作用的胃癌细胞迁移和克隆能力的影响 | 第70-72页 |
| 4.4 讨论 | 第72-74页 |
| 第五章 hucMSC来源的exosomes通过转运 1433ζ 蛋白活化自噬预防顺铂诱导的肾损伤 | 第74-98页 |
| 5.1 材料与仪器 | 第74-75页 |
| 5.1.1 主要材料 | 第74页 |
| 5.1.2 抗体 | 第74-75页 |
| 5.1.3 信号通路抑制剂 | 第75页 |
| 5.1.4 主要仪器 | 第75页 |
| 5.2 实验方法 | 第75-78页 |
| 5.2.1 双标腺病毒m RFP-GFP-LC3转染及自噬小体检测 | 第75页 |
| 5.2.2 ENZO试剂盒检测自噬小体 | 第75-76页 |
| 5.2.2.1 荧光显微镜观察Cyto-ID绿色荧光染料标记的自噬小体 | 第75-76页 |
| 5.2.2.2 流式细胞仪检测Cyto-ID绿色荧光染料标记的自噬小体 | 第76页 |
| 5.2.3 信号通路抑制剂LY294002和U0126作用模型的建立 | 第76页 |
| 5.2.4 1433ζ 腺病毒过表达载体转染huc MSC | 第76-77页 |
| 5.2.5 1433ζ 敲减慢病毒转染huc MSC | 第77页 |
| 5.2.6 流式细胞技术分析细胞凋亡 | 第77页 |
| 5.2.7 TUNEL方法检测细胞凋亡 | 第77页 |
| 5.2.8 血清肌酐和尿素氮检测 | 第77页 |
| 5.2.9 NRK-52E细胞培养 | 第77页 |
| 5.2.10 HucMSC-ex的提取 | 第77页 |
| 5.2.11 HucMSC-ex的标记及内化 | 第77页 |
| 5.2.12 Western blot、免疫荧光、HE染色和免疫组化实验 | 第77页 |
| 5.2.13 统计学分析 | 第77-78页 |
| 5.3 实验结果 | 第78-94页 |
| 5.3.1 HucMSC-ex在预防顺铂诱导的肾损伤中可以活化自噬 | 第78-80页 |
| 5.3.2 HucMSC-ex诱导自噬的发生不通过AKT信号通路和ERK信号通路 | 第80-82页 |
| 5.3.3 HucMSC-ex转运 1433ζ 参与自噬的活化 | 第82-83页 |
| 5.3.4 过表达 1433ζ 增强自噬减缓顺铂诱导的NRK-52E细胞损伤 | 第83-87页 |
| 5.3.5 低表达 1433ζ 减弱自噬加重顺铂诱导的NRK-52E细胞损伤 | 第87-90页 |
| 5.3.6 过表达 1433ζ 增强自噬预防顺铂诱导的大鼠肾损伤 | 第90-94页 |
| 5.4 讨论 | 第94-98页 |
| 第六章 1433ζ 调节自噬的机制研究 | 第98-104页 |
| 6.1 实验材料与试剂 | 第98页 |
| 6.1.1 主要材料 | 第98页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第98页 |
| 6.1.3 主要抗体 | 第98页 |
| 6.1.4 实验仪器 | 第98页 |
| 6.2 实验方法 | 第98-99页 |
| 6.2.1 免疫共沉淀 | 第98-99页 |
| 6.3 研究结果 | 第99-102页 |
| 6.3.1 HucMSC-ex促进ATG16L表达 | 第99-100页 |
| 6.3.2 1433ζ 与ATG16L间存在相互作用 | 第100-102页 |
| 6.4 讨论 | 第102-104页 |
| 第七章 结论与展望 | 第104-106页 |
| 7.1 主要结论 | 第104页 |
| 7.2 研究创新点 | 第104页 |
| 7.3 展望 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-125页 |
| 致谢 | 第125-126页 |
| 攻读博士学期间发表的文章 | 第126页 |
