| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 本文所用主要缩略词 | 第14-16页 |
| 第一部分 文献综述 | 第16-52页 |
| 第一章 细胞质雄性不育与恢复基因研究进展 | 第16-30页 |
| 1 植物细胞质雄性不育 | 第16-23页 |
| ·植物细胞质雄性不育的类型 | 第16-17页 |
| ·植物细胞质雄性不育与细胞质遗传系统 | 第17-23页 |
| ·叶绿体基因组与细胞质雄性不育 | 第17-18页 |
| ·线粒体基因组与细胞质雄性不育 | 第18-23页 |
| ·玉米 | 第18-19页 |
| ·水稻 | 第19-20页 |
| ·矮牵牛 | 第20-21页 |
| ·油菜 | 第21-22页 |
| ·高粱 | 第22-23页 |
| ·细胞质雄性不育的发育调控机理假说 | 第23页 |
| 2 植物CMS育性恢复基因研究进展 | 第23-27页 |
| ·玉米 | 第23-24页 |
| ·矮牵牛 | 第24-25页 |
| ·萝卜 | 第25页 |
| ·水稻 | 第25-27页 |
| 3 棉花细胞质雄性不育及其恢复基因研究进展 | 第27-30页 |
| 第二章 PPR基因家族研究进展 | 第30-40页 |
| 1 PPR基因家族的结构特点 | 第30-32页 |
| 2 PPR基因家族在染色体上的分布及其在不同生物中的数量 | 第32-33页 |
| ·PPR基因在染色体上的分布 | 第32页 |
| ·PPR基因在不同生物中的分布 | 第32-33页 |
| 3 PPR蛋白的功能 | 第33-40页 |
| ·PPR蛋白对叶绿体和线粒体基因的调控作用 | 第33-34页 |
| ·PPR蛋白参与植物细胞质雄性不育系统的育性恢复过程 | 第34-36页 |
| ·PPR蛋白作为反式作用因子参与植物特异的RNA编辑过程 | 第36-37页 |
| ·PPR蛋白影响高等植物的胚胎发生 | 第37-40页 |
| 第三章 植物基因克隆技术研究进展 | 第40-52页 |
| 1 图位克隆 | 第40-44页 |
| ·目标基因的精细定位 | 第40-43页 |
| ·RAPD | 第41页 |
| ·SSR | 第41-42页 |
| ·STS | 第42页 |
| ·SNP | 第42-43页 |
| ·构建含有大插入片段的基因组文库 | 第43页 |
| ·构建目标区域的物理图谱 | 第43页 |
| ·目的基因的筛选和鉴定 | 第43-44页 |
| 2 转座子或T-DNA标签法 | 第44-45页 |
| 3 功能克隆 | 第45-46页 |
| ·根据基因表达的蛋白质 | 第45页 |
| ·根据基因的表型突变互补功能 | 第45-46页 |
| ·酵母双杂交 | 第46页 |
| 4 差异表达克隆 | 第46-48页 |
| ·mRNA差异显示 | 第46-47页 |
| ·抑制消减杂交 | 第47-48页 |
| 5 同源序列克隆技术 | 第48页 |
| 6 电子克隆 | 第48-50页 |
| 本研究的目的和意义 | 第50-52页 |
| 第二部分 研究报告 | 第52-102页 |
| 第四章 棉花CMS育性恢复基因的图位克隆 | 第52-86页 |
| 1 材料 | 第53-56页 |
| ·植物材料 | 第53-54页 |
| ·分子标记种类及其来源 | 第54-55页 |
| ·SSR标记 | 第54页 |
| ·RAPD标记 | 第54页 |
| ·STS标记 | 第54-55页 |
| ·BAC文库 | 第55页 |
| ·菌株和质粒 | 第55页 |
| ·酶和试剂 | 第55页 |
| ·网络资源及应用软件 | 第55-56页 |
| ·引物 | 第56页 |
| 2 方法 | 第56-65页 |
| ·育性调查 | 第56-57页 |
| ·棉花基因组DNA的提取方法 | 第57-58页 |
| ·分子标记分析 | 第58-59页 |
| ·SSR分析 | 第58-59页 |
| ·微卫星的PCR扩增 | 第58页 |
| ·PAGE/银染分析 | 第58-59页 |
| ·RAPD分析 | 第59页 |
| ·RAPD扩增 | 第59页 |
| ·RAPD产物检测 | 第59页 |
| ·STS分析 | 第59页 |
| ·STS扩增 | 第59页 |
| ·STS产物检测 | 第59页 |
| ·遗传图谱的构建 | 第59-60页 |
| ·PCR法筛选BAC文库 | 第60页 |
| ·BAC质粒DNA的微量提取 | 第60-62页 |
| ·单个离心管提取BAC质粒DNA | 第60-61页 |
| ·96孔板提取BAC质粒DNA | 第61-62页 |
| ·物理图谱构建 | 第62-63页 |
| ·NotⅠ酶切检测阳性克隆的插入片段 | 第62页 |
| ·阳性克隆的HindⅢ酶切指纹图谱分析 | 第62-63页 |
| ·重叠群的构建 | 第63页 |
| ·棉花恢复基因同源EST的检索和分析 | 第63页 |
| ·包含Rf_1BAC克隆的确定与全长测序 | 第63-64页 |
| ·感受态细胞的制备及大肠杆菌的转化 | 第64页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第64页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第64页 |
| ·扩增产物的电泳,回收,克隆及测序 | 第64-65页 |
| 3 结果与分析 | 第65-81页 |
| ·BC1群体遗传分析 | 第65-66页 |
| ·分子标记分析 | 第66-69页 |
| ·EST-SSR多态性的筛选 | 第66页 |
| ·恢复基因Rf_1的精细定位 | 第66-68页 |
| ·分子标记来源及特征带大小 | 第68-69页 |
| ·6个EST-SSR的源EST序列分析 | 第69-70页 |
| ·EST-SSR标记的BAC文库筛选 | 第70-71页 |
| ·恢复基因助位点物理图谱的构建 | 第71-72页 |
| ·阳性克隆的HindⅢ酶切指纹分析 | 第71-72页 |
| ·重叠群的构建 | 第72页 |
| ·利用同源克隆法对棉花EST数据库中恢复基因同源EST的组装及分析 | 第72-73页 |
| ·包含Rf_1基因BAC克隆的确定及Rf_1候选ORF的筛选 | 第73-78页 |
| ·Rf_1候选ORF验证 | 第78-81页 |
| 4 讨论 | 第81-86页 |
| ·育性恢复基因紧密连锁标记的应用 | 第81页 |
| ·利用图位克隆与同源克隆相结合的策略克隆棉花的CMS育性恢复基因 | 第81-84页 |
| ·棉花助基因是PPR基因家族成员 | 第84-85页 |
| ·恢复基因的进化及育性恢复机理探讨 | 第85-86页 |
| 第五章 陆地棉5个PPR基因家族成员的克隆和特征分析 | 第86-102页 |
| 1 试验材料 | 第86-88页 |
| ·植物材料 | 第86页 |
| ·菌株和质粒 | 第86页 |
| ·酶和试剂 | 第86-87页 |
| ·引物 | 第87-88页 |
| 2 方法 | 第88-93页 |
| ·陆地棉中PPR基因的分析和鉴定 | 第88-89页 |
| ·从基因组水平的预测分析和鉴定PPR基因 | 第88页 |
| ·从EST水平检索与PPR蛋白同源的陆地棉EST并进行组装与分析 | 第88-89页 |
| ·感受态细胞的制备及大肠杆菌的转化 | 第89页 |
| ·棉花总RNA的提取及DNaseI消化 | 第89-91页 |
| ·实验前准备 | 第89-90页 |
| ·CTAB-酸酚法 | 第90页 |
| ·DNasell消化 | 第90-91页 |
| ·TR-PCR分析 | 第91-92页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第91页 |
| ·RT-PCR | 第91-92页 |
| ·扩增产物的电泳,回收,克隆及测序 | 第92页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR分析 | 第92-93页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR引物的特异性检测 | 第92页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR反应 | 第92-93页 |
| 3 结果与分析 | 第93-99页 |
| ·NCBI陆地棉数据库中PPR基因家族分析 | 第93-94页 |
| ·陆地棉BAC序列中PPR基因家族的预测 | 第93页 |
| ·陆地棉EST数据库中PPR基因家族的预测 | 第93-94页 |
| ·5个GhPPR基因的克隆和基因组结构分析 | 第94-95页 |
| ·5个GhPPR基因的特征分析 | 第95-97页 |
| ·5个GhPPR基因的时空表达分析 | 第97-98页 |
| ·GhPPR蛋白和其它植物PPR蛋白的系统进化分析 | 第98-99页 |
| ·5个GhPPR基因在恢复系和不育系的RT-PCR分析 | 第99页 |
| 4 讨论 | 第99-102页 |
| ·陆地棉PPR基因家族的预测 | 第99-100页 |
| ·5个陆地棉GhPPR基因的电子克隆 | 第100页 |
| ·陆地棉PPR基因家族的结构与功能 | 第100-102页 |
| 全文结论 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-116页 |
| 附录 | 第116-122页 |
| 致谢 | 第122-124页 |
| 发表论文 | 第124页 |
