| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一部分 文献综述 | 第8-21页 |
| 1 植物对胁迫的应答反应 | 第8-11页 |
| ·冷胁迫的类型及造成冷害的主要原因 | 第9-10页 |
| ·生物膜的结构组成与植物抗寒性关系 | 第10-11页 |
| 2 植物基因启动子研究进展 | 第11-16页 |
| ·植物启动子的结构和功能 | 第11-12页 |
| ·植物基因启动子分类 | 第12-15页 |
| ·组成型启动子 | 第12-13页 |
| ·诱导型启动子 | 第13-14页 |
| ·组织特异性启动子 | 第14-15页 |
| ·启动子克隆的意义 | 第15-16页 |
| 3 植物低温信号转录因子研究进展 | 第16-20页 |
| ·植物转录因子的结构和功能 | 第16-17页 |
| ·转录因子作用的分子机理 | 第17-18页 |
| ·低温胁迫下CBF基因的表达与调控 | 第18-20页 |
| ·CBF基因及其作用 | 第18-19页 |
| ·CBF基因的表达 | 第19-20页 |
| 4 研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二部分 实验部分 | 第21-45页 |
| 第一章 拟南芥启动子CBF3和rd29A的克隆及载体构建 | 第21-36页 |
| 1 引言 | 第21页 |
| 2 主要仪器 | 第21-22页 |
| 3 实验材料及主要试剂 | 第22页 |
| 4 常用溶液的配制 | 第22-24页 |
| ·培养基的配制 | 第22页 |
| ·一般溶液的配制 | 第22-23页 |
| ·实验试剂的配制 | 第23-24页 |
| ·DNA提取液的配制 | 第23页 |
| ·质粒的提取液的配制 | 第23-24页 |
| ·感受态细胞的制备液的配制 | 第24页 |
| 5 实验方法 | 第24-31页 |
| ·拟南芥基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·拟南芥种子消毒 | 第24页 |
| ·拟南芥的人工培养 | 第24页 |
| ·拟南芥总DNA的提取方法(CTAB法) | 第24-25页 |
| ·PCR扩增 | 第25-27页 |
| ·引物设计 | 第25-26页 |
| ·PCR反应 | 第26-27页 |
| ·PCR产物的回收 | 第27页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第27-28页 |
| ·重组质粒的转化 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第28页 |
| ·重组质粒的转化 | 第28-29页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组质粒提取 | 第29页 |
| ·酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第30-31页 |
| ·连接反应 | 第30页 |
| ·重组子导入大肠杆菌 | 第30页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| ·质粒转化农杆菌 | 第31页 |
| 6 结果与分析 | 第31-34页 |
| ·启动子CBF3的克隆及植物表达载体的构建 | 第31-33页 |
| ·拟南芥基因组DNA提取 | 第31-32页 |
| ·拟南芥CBF3启动子PCR扩增 | 第32页 |
| ·植物表达载体pBC-GUS酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·农杆菌转化子的PCR鉴定 | 第33页 |
| ·启动子rd29A的克隆及植物表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·拟南芥rd29A启动子PCR扩增 | 第33页 |
| ·植物表达载体pBA-GUS酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·农杆菌转化子的PCR鉴定 | 第34页 |
| 7 讨论 | 第34-36页 |
| 第二章 启动子CBF3和rd29A的活性检测 | 第36-45页 |
| 1 引言 | 第36页 |
| 2 实验材料及主要试剂 | 第36页 |
| 3 常用溶液的配制 | 第36-37页 |
| ·培养基的配制 | 第36页 |
| ·一般溶液的配制 | 第36-37页 |
| ·实验试剂的配制 | 第37页 |
| ·拟南芥的转化悬浮液配制 | 第37页 |
| ·GUS染色液的配制 | 第37页 |
| 4 实验方法 | 第37-40页 |
| ·根瘤农杆菌介导的转化 | 第37-38页 |
| ·菌液准备 | 第37-38页 |
| ·转化方法 | 第38页 |
| ·拟南芥的遗传转化方法 | 第38页 |
| ·烟草的遗传转化方法 | 第38页 |
| ·鉴定转基因植株 | 第38-40页 |
| ·种子消毒和播种 | 第38-39页 |
| ·拟南芥种子消毒 | 第38-39页 |
| ·烟草种子消毒 | 第39页 |
| ·小量提取DNA的方法 | 第39页 |
| ·PCR检测 | 第39-40页 |
| ·转基因烟草GUS基因表达的组织化学分析 | 第40页 |
| 5 结果与分析 | 第40-43页 |
| ·转基因拟南芥植株的获得 | 第40-41页 |
| ·烟草转基因抗性植株的获得 | 第41-42页 |
| ·转pBC-GUS植株的获得 | 第41页 |
| ·转pBA-GUS植株的获得 | 第41-42页 |
| ·转基因烟草植株的PCR鉴定 | 第42-43页 |
| ·转pBC-GUS植株的PCR鉴定 | 第42页 |
| ·转pBA-GUS植株的PCR鉴定 | 第42-43页 |
| ·转基因烟草GUS基因表达的组织化学分析 | 第43页 |
| 6 讨论 | 第43-45页 |
| 第三部分 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 附录1 英文缩略语 | 第51-52页 |
| 附录2 在读期间发表论文 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |