| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 柑橘原生质体电击转化体系的建立 | 第11-33页 |
| 1 前言 | 第11-18页 |
| ·课题的提出 | 第11页 |
| ·前人研究进展 | 第11-17页 |
| ·原生质体遗传转化方法 | 第11-15页 |
| ·GFP荧光蛋白的研究 | 第15-16页 |
| ·原生质体瞬时表达体系在细胞分子生物学中的应用 | 第16-17页 |
| ·研究目的和意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-24页 |
| ·实验材料 | 第18-19页 |
| ·柑橘愈伤组织和叶片 | 第18页 |
| ·供试菌株和质粒 | 第18-19页 |
| ·实验方法 | 第19-24页 |
| ·质粒 DNA的提取 | 第19-20页 |
| ·胚性愈伤悬浮系的建立及叶片准备 | 第20页 |
| ·原生质体分离纯化 | 第20-21页 |
| ·原生质体电击转化 | 第21-22页 |
| ·PEG法介导的原生质体转化 | 第22-23页 |
| ·转化后的原生质体培养 | 第23页 |
| ·实验结果统计及GFP荧光观察 | 第23-24页 |
| 3 结果与分析 | 第24-30页 |
| ·不同材料电敏感性比较 | 第24页 |
| ·电击参数的优化 | 第24-25页 |
| ·选用不同材料进行电击转化 | 第25-26页 |
| ·电击缓冲液pH和原生质体预处理对转化效率的影响 | 第26-27页 |
| ·PEG法介导的遗传转化 | 第27页 |
| ·原生质体的荧光观察 | 第27-29页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察mGFP5-ER在原生质体中的定位 | 第29-30页 |
| 4 讨论 | 第30-33页 |
| ·影响转化效率的因素 | 第30-32页 |
| ·原生质体的质量 | 第30页 |
| ·电击参数 | 第30页 |
| ·质粒的质量和浓度 | 第30-31页 |
| ·电击缓冲液的成分和pH | 第31-32页 |
| ·电击前原生质体预处理 | 第32页 |
| ·电击转化法和 PEG介导转化法比较 | 第32-33页 |
| 第二章 根癌农杆菌介导的GFP转化默科特橘橙 | 第33-51页 |
| 1 前言 | 第33-37页 |
| ·根癌农杆菌介导的遗传转化研究进展 | 第33-36页 |
| ·转入基因类型 | 第34-35页 |
| ·所用外植体类型 | 第35-36页 |
| ·研究目的和意义 | 第36-37页 |
| 2 材料和方法 | 第37-41页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·外植体材料的准备 | 第37页 |
| ·主要培养基配方 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-41页 |
| ·农杆菌转化默科特橘橙的不同外植体 | 第37-38页 |
| ·柑橘基因组的小量法 DNA提取 | 第38-39页 |
| ·转基因胚性愈伤组织的PCR鉴定 | 第39-40页 |
| ·转基因材料的荧光检测 | 第40页 |
| ·激光共聚焦荧光显微镜观察 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-47页 |
| ·胚性愈伤组织遗传转化 | 第41-43页 |
| ·转化效率评价 | 第41页 |
| ·胚性愈伤组织的荧光检测 | 第41-42页 |
| ·抗性愈伤组织的分子鉴定 | 第42-43页 |
| ·以上胚轴切段、子叶和根轴联结体为外植体的遗传转化 | 第43-47页 |
| ·转化效率评价 | 第43-44页 |
| ·抗性芽的荧光检测 | 第44-45页 |
| ·激光共聚焦显微镜的荧光观察 | 第45-47页 |
| 4 讨论 | 第47-51页 |
| ·提高农杆菌介导的遗传转化效率的方法 | 第47-49页 |
| ·选择合适的基因型进行转化 | 第47页 |
| ·外植体状态及类型 | 第47-48页 |
| ·培养方式 | 第48-49页 |
| ·小结 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-62页 |
| 致谢 | 第62页 |