| 摘要 | 第10-11页 |
| abstract | 第11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 绒山羊简介 | 第12页 |
| 1.2 毛囊的介绍 | 第12-17页 |
| 1.2.1 毛囊的结构 | 第12-14页 |
| 1.2.2 毛囊的发生 | 第14页 |
| 1.2.3 毛囊生长的周期性循环 | 第14-15页 |
| 1.2.4 毛囊周期性循环生长的分子调控 | 第15-16页 |
| 1.2.5 绒山羊次级毛囊生长发育规律 | 第16-17页 |
| 1.3 miRNA的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.3.1 miRNA的介绍 | 第17页 |
| 1.3.2 miRNA的合成与生物学功能 | 第17页 |
| 1.3.3 miRNA在山羊中的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3.4 miRNA在皮肤和毛囊中的研究 | 第18-19页 |
| 1.3.5 miR-143的研究现状 | 第19页 |
| 1.4 试验技术 | 第19-21页 |
| 1.4.1 高通量转录组测序 | 第19-20页 |
| 1.4.2 荧光定量PCR | 第20页 |
| 1.4.3 荧光原位杂交 | 第20-21页 |
| 1.4.4 免疫组化技术 | 第21页 |
| 1.4.5 荧光素酶报告基因检测系统 | 第21页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 次级毛囊中mi RNAs的鉴定以及部分mi RNAs的定量与定位 | 第22-41页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第22-24页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第22页 |
| 2.1.2 主要仪器设备和试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要试剂的配制 | 第23页 |
| 2.1.4 统计及分析软件 | 第23-24页 |
| 2.2 试验方法 | 第24-32页 |
| 2.2.1 次级毛囊样本的采集 | 第24页 |
| 2.2.2 总RNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.3 RNA凝胶电泳 | 第25-26页 |
| 2.2.4 RNA测序 | 第26页 |
| 2.2.5 miRNA高通量测序的生物信息学分析 | 第26页 |
| 2.2.6 部分mi RNAs c DNA的合成 | 第26-27页 |
| 2.2.7 引物的设计与合成 | 第27页 |
| 2.2.8 PCR扩增产物 | 第27-28页 |
| 2.2.9 PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物 | 第28页 |
| 2.2.10 PCR产物的纯化,普通琼脂糖凝胶DNA回收试验 | 第28-29页 |
| 2.2.11 质粒的转化 | 第29-30页 |
| 2.2.12 转化菌落的PCR鉴定及培养 | 第30页 |
| 2.2.13 高表达mi RNA RT-PCR分析 | 第30-31页 |
| 2.2.14 统计分析 | 第31页 |
| 2.2.15 组织的采集和处理 | 第31页 |
| 2.2.16 组织固定与包埋 | 第31页 |
| 2.2.17 冷冻切片的制作 | 第31-32页 |
| 2.2.18 原位杂交 | 第32页 |
| 2.3 结果与分析 | 第32-38页 |
| 2.3.1 次级毛囊三个生长时期鉴定的mi RNAs | 第32-33页 |
| 2.3.2 次级毛囊不同时期差异表达的mi RNAs | 第33-34页 |
| 2.3.3 辽宁绒山羊次级毛囊部分mi RNA q PCR初步结果 | 第34-36页 |
| 2.3.4 mi RNA-92b在表皮和毛囊中的定量分析 | 第36页 |
| 2.3.5 miRNA-143在表皮和毛囊中的定量分析 | 第36-37页 |
| 2.3.6 miRNA-203在表皮和毛囊中的定量检测分析 | 第37页 |
| 2.3.7 miR-143在次级毛囊中的定位检测 | 第37-38页 |
| 2.3.8 miR-203在次级毛囊中的定位检测 | 第38页 |
| 2.4 讨论 | 第38-40页 |
| 2.4.1 次级毛囊的分离和RNA的提取 | 第38-39页 |
| 2.4.2 高通量测序和生物信息学分析 | 第39页 |
| 2.4.3 miRNA在毛囊中的组织表达特性 | 第39页 |
| 2.4.4 冷冻切片的制作和原位杂交 | 第39页 |
| 2.4.5 mi R-143和mi R-203 的定位 | 第39-40页 |
| 2.5 小结 | 第40-41页 |
| 第三章 mi R-143 与其靶基因ITGA6 的作用关系 | 第41-51页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第41页 |
| 3.1.1 试验样本 | 第41页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第41页 |
| 3.1.3 试剂耗材 | 第41页 |
| 3.2 试验方法 | 第41-46页 |
| 3.2.1 miR-143潜在靶基因的预测 | 第41页 |
| 3.2.2 miR-143与靶基因结合位点的预测 | 第41-42页 |
| 3.2.3 mir GLO-ITGA6 重组质粒的合成 | 第42-44页 |
| 3.2.4 mi R-143与ITGA6 结合位点的突变 | 第44-45页 |
| 3.2.4.1 设计反向 PCR 扩增引物 | 第44页 |
| 3.2.4.2 目标质粒扩增 | 第44页 |
| 3.2.4.3 Dpn I 消化 | 第44页 |
| 3.2.4.4 重组反应 | 第44页 |
| 3.2.4.5 细胞的换液 | 第44页 |
| 3.2.4.6 细胞转染 | 第44-45页 |
| 3.2.5 mi R-143和ITGA6 的双荧光素酶检测 | 第45页 |
| 3.2.6 荧光素酶结果的统计学分析 | 第45页 |
| 3.2.7 ITGA6的免疫组化 | 第45-46页 |
| 3.3 结果与分析 | 第46-49页 |
| 3.3.1 mi R-143 对潜在靶基因ITGA6 有靶向抑制作用 | 第46-49页 |
| 3.3.2 在次级毛囊中的ITGA6定位检测 | 第49页 |
| 3.4 讨论 | 第49-50页 |
| 3.4.1 miR-143靶基因的预测 | 第49-50页 |
| 3.4.2 重组质粒的提取 | 第50页 |
| 3.4.3 mi R-143与ITGA6 的相互作用关系 | 第50页 |
| 3.5 小结 | 第50-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
